自噬是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene,Atg)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。对实现细胞代谢需要、更新某些细胞器并维持细胞内稳态有较重要的作用。
近几年,自噬研究的热度不减,国自然相关研究的中标数量也呈增长趋势,在2016年,自噬相关研究被授予了诺贝尔生理医学奖。
自噬国自然中标趋势
自噬是一种非常基础的生命活动现象,它可能参与生命活动的方方面面,比如肿瘤、炎症、免疫应答、氧化应激等。通常情况下,除了研究自噬现象本身,大家更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来,把自噬作为这些方向的一个机制来研究。
比如研究自噬如何参与肿瘤的发生发展、如何参与肿瘤的耐药性与复发转移、如何参与肿瘤免疫治疗的效果、自噬如何参与炎症反应、自噬如何参与氧化应激,甚至自噬如何参与自闭症、阿兹海默症的发生与治疗等。汉恒生物也为大家整理了基础的自噬研究模式:
在2017年7月汉恒客户发表的Cell论文中(文章名:Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy),也是运用了这一思路。
I-自噬参与表型-汉恒自噬黄金标准(后文详解)
II-自噬在表型中起了关键作用-CQ(氯喹)抑制自噬看表型
III-自噬通路关键基因变化导致表型
自噬关键基因的人为干预
自噬关键基因变化的分子机制以及跟对应表型的关系
自噬表型研究中,汉恒生物一直倡导 “自噬研究的金指标”----包括LC3剪切的变化、电镜直接观察到自噬囊泡、荧光蛋白标记的LC3监测自噬流。
图A 图B 图C
衡量自噬的三个“黄金标准”,分别是LC3的翻译后加工及脂化修饰(图A)、利用电镜直接观察自噬小体和自噬溶酶体的多少(图B)、荧光蛋白标记的LC3监测自噬流(图C)。
荧光蛋白标记的LC3监测自噬流,即用汉恒的mRFP-GFP-LC3融合蛋白的腺病毒,感染细胞。mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。
就像这样:
汉恒生物为大家详细整理了:自噬研究手册
PART1:自噬的概念及自噬切入角度
PART2:自噬的“黄金标准” 及调控自噬流的方法
PART3:自噬领域的金牌研究工具
PART4:基因的操作在自噬研究过程的作用
PART5:其他细胞器的自噬研究和自噬流荧光数据的处理
一张图概括自噬研究
作者:汉恒生物科技(上海)有限公司 2018-09-03T11:45 (访问量:23580)
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