产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10 mL试剂二充分溶解。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。
 
产品说明：
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在275nm下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。
试验所需自备仪器和样品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰和蒸馏水。
 
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到275 nm，蒸馏水调零。
2. 按下表操作：
 
测定管
对照管
样本（μL）
20
-
试剂一（μL）
100
100
混匀，37℃保温10min。
试剂三（μL）
100
100
摇匀1min。
样本（μL）
 -
20
混匀后10000rpm 4℃ 离心10min，取上清用微量石英比色皿/96孔UV板测定A275nm。计算∆A=A测定-A对照
 
（注意对照管后加粗酶液，而测定管先加粗酶液）
 
 
三、胃蛋白酶活性计算：
1、用石英比色皿
（1） 按样本蛋白浓度计算：
活性单位（U）定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（Cpr×V样本）÷T
                    = 0.786×∆A÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
活性单位（U）定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/g 鲜重）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（W×V样本÷V提）÷T
                    =0.786×∆A÷W。
（3）按液体体积计算：
活性单位（U）定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/mL）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（V样本÷V提×V液）÷T
                 = 0.786×∆A
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V反总：反应总体积，0.22mL；V提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V样本：加入样本体积，0.02mL；V液：液体体积，0.1mL；Ɛ：酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，1cm。
2、用96孔UV板
（1）按样本蛋白浓度计算：
活性单位（U）定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（Cpr×V样本）÷T
                    = 1.31×∆A÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
活性单位（U）定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/g 鲜重）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（W×V样本÷V提）÷T
                    =1.31×∆A÷W
（3）按液体体积计算：
活性单位（U）定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/mL）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（V样本÷V提×V液）÷T
                 = 1.31×∆A
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V反总：反应总体积，0.22mL；V提：V提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V样本：加入样本体积，0.02mL；V液：液体体积，0.1mL；Ɛ：酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，0.6TUNEology 波长可调检测卡盒-->