Glutathione Sepharose 4FF的预装柱

货号：YA2430

保存：2-8℃，20%乙醇

产品介绍：

pGEX 系列表达载体表达的融合蛋白与谷胱甘肽 S-转移酶结合，因此可以使用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶填料进行纯化。pGEX 是一类以谷胱甘肽（γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽-琼脂糖凝胶亲和层析填料纯化 GST 融合蛋白的效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合 GST 融合蛋白。

纯化流程：

1、Buffer 的准备 

所有缓冲液需要用0.45um的过滤器过滤。

常用下面的缓冲液，适用于大部分GST 融合蛋白：

结合缓冲液：PBS，pH 7.3

洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl，10mM 还原型谷胱甘肽，pH 8.0

2、样品准备 

在将样品上样之前，应将样品用 0.45um 过滤器进行过滤或离心。如果样品太粘稠，应用结合缓冲液稀释，以防止堵塞色谱柱。

3、样品纯化 

1) 平衡：用5-10个柱体积的结合缓冲液平衡该柱。

2) 上样：样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。盐浓度太大的样品需要处理后再上样。 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质和没有结合的蛋白，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

3) 洗脱：洗脱缓冲液使用阶梯梯度或线性梯度洗脱。对于洗脱步骤，5个柱体积的洗脱缓冲液通常就足够了。对于线性梯度洗脱，适当增加洗脱步骤。

4、SDS-PAGE检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

5、注意事项

(1) 上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。

(2) 在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。

(3) 不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。

(4) 影响 GST 标记蛋白或其他谷胱甘肽结合蛋白与谷胱甘肽琼脂糖 4FF 结合的最重要的参数之一是流速。由于 GST 和谷胱甘肽之间的相对较慢的结合动力学，重要的是在样品使用期间保持低流速以获得最大结合能力。蛋白质特性，pH 和温度是可能影响结合能力的其他因素。