实验原理

    流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理：由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期,S 期和G2/M 期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。

应用：
肿瘤细胞周期的检测
目的基因瞬转/稳转细胞系的细胞周期研究
小分子化合物/多肽等药物筛选及功能安全性研究
中药/中间体等药物筛选及功能安全性研究
目的基因过表达的基因功能研究
目的基因RNAi干扰的基因功能研究
microRNA过表达/干扰的调控机制研究

服务内容：

1. 细胞培养。     
2. 流式周期检测。

服务流程：

1. 取对数生长期的细胞，均以4×105/mL 密度接种于6孔细胞培养板上；
2. 培养过夜后，用相应药物处理细胞；
3. 消化收集细胞，包括培养液中悬浮的死细胞；
4. 收集的细胞经PBS缓冲液洗一次后，去上清，将细胞逐滴加入70%预冷的乙醇中，4℃避光固定30 min；
5. 加BSA，离心去上清，重悬细胞于PBS缓冲液，再次离心，去上清；
6. 重悬细胞于含100 unit/mL RNA酶的PBS缓冲液中，避光37℃处理30 min；
7. 加2 mg/mL PI至终浓度50 mg/mL，避光孵育30 min，过滤后上流式细胞仪分析。
8. 
   
9. 客户提供：

10. 1、样本

    1) 提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血；

    2) 提供新鲜的培养细胞，

    3) 提供新鲜组织，需要实验室制备成单细胞悬液。

    2、信息：

    1）样本信息（细胞系，分组）

    2）细胞处理要求（如需培养、处理细胞的话）

    3、试剂

    1) 细胞处理药物或其他处理试剂（如需培养、处理细胞的话）

    2) 流式周期检测试剂盒（PI）（一般由实验室提供）

    尽量采用新鲜样本检测，如实在来不及，可加预冷70%乙醇，于4℃固定过夜，24h内检测。

11. 服务周期：
    根据具体实验方案，一般1-2周。
    
    服务承诺：
    只需要提供给我们新鲜的样品，我们将完成样本处理，指标测定，并根据您的要求提供完整的实验报告。实验报告包括详细的实验方法及实验结果的相关数据。