GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
产品名称： GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
英文名称： GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
产品编号： 20509ES03
产品价格： 318.00
产品产地： 翌圣生物
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2023-10-27T09:21:56
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 1mL | 318.0 |
| 5×1mL | 1348.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二维码 : 点击查看
产品简介
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。在结构上，该树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL是装填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一种中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品信息
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货号 |
20509ES03/20509ES08 |
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规格 |
1 mL /5×1 mL |
产品性质
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基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
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配体（Ligand） |
通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
>10 mg GST蛋白（40 kDa）/mL基质 |
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最大压力（PressureMax） |
0.3 MPa，3 bar |
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pH稳定范围（pH range） |
3-12 |
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储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，1.8 mM KH2PO4，pH 7.4
洗脱缓冲液：用平衡液配制10 mM 还原型谷胱甘肽（现配现用）
【注】平衡/洗杂缓冲液或洗脱缓冲液中可加入1-10 mM DTT。
使用说明
【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
1. 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
注意：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3. 填料清洗
GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。
1）去除一些沉淀或变形物质
用2倍柱体积的6 M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。
注意事项
1.请勿冷冻保存本产品。
2.所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3.本产品仅作科研用途。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
附表 问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗树脂 |
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裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除 |
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样品太黏稠 |
样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5 µg/mL），Mg2+（终浓度1 mM），冰上孵育10-15 min |
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缓冲液太黏稠 |
有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速 |
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洗脱组分中无目的蛋白 |
GST标签蛋白变性了 |
使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准 |
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过度的裂解使目的蛋白变性 |
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目的蛋白聚集产生沉淀 |
在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10 mM |
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融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力 |
测定pGEX中GST的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力 |
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降低结合温度至4℃，充分清洗 |
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柱子平衡时间太短，目的蛋白不是在pH 6.5-pH 8.0范围内结合 |
用pH 6.5-pH 8.0的buffer进行充分的平衡，如PBS |
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目的蛋白没有完全洗脱下来 |
洗脱体积太少 |
增加洗脱液体积，减小洗脱流速。 |
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洗脱液中谷胱甘肽浓度太低 |
增加洗脱液中还原型谷胱甘肽浓度，可尝试用20-40 mM还原型谷胱甘肽洗脱。 |
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低pH影响洗脱 |
在不增加洗脱液中谷胱甘肽量时，提高洗脱液中pH至pH 8-9会有改善 |
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增加洗脱液中离子强度，如0.1-0.2 M NaCl |
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洗脱液中谷胱甘肽被氧化 |
使用新鲜配制的洗脱液 |
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加入DTT |
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非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱 |
洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20 |
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电泳或Western Blot检测中发现多条带 |
Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来 |
Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物，可以在目的蛋白中加入50 mM Tris-HCl，2 mM ATP，10 mM MgSO4，pH 7.4在37℃加热10min去除 |
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可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白 |
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GST融合蛋白已经发生降解 |
在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF |
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可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT） |
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细胞破碎过度 |
减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10 mg/mL溶菌酶，25 mM Tris-HCl，pH 8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。 |
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共价共纯化 |
包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化，如：DnaK（Mr～70000），DnaJ（Mr～37000），GrpE（Mr～40000），GroEL（Mr～57000），GroES（Mr～10000） |
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抗体与E. coli的各种蛋 白反应 |
抗体吸附E. coli蛋白：GST-抗体；超声处理去除GST抗体，可以用Western Blot检测 |
Ver.CN20230921