BL21(DE3)pLysS感受态细胞

产品简介： 

  本公司生产的BL21（DE3）pLysS感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达 107，-70℃保存6 个月转化效率不发生改变。 

基因型：F-, ompT, hsdSB(rB-mB-), dcm, gal(DE3), pLysS, Cmr 

特点：该菌株带有质粒 pLysS，因此具有氯霉素抗性。质粒 pLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 

操作方法： （以下各步骤均为无菌操作） 

1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。 

3、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，不要摇动离心管。 

4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 150rpm振荡培养 1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA总量较多，可取 100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA总量较少，可取 200-300ul 的转化产物涂板。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 

注意事项： 

    1、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。 

    2、感受态细胞不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。 

    3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。 

    4、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失将到*低。

相关产品： 

 I1020 IPTG  溶液 (50mg/ml) 

 K1030 Kanamycin (100mg/ml)卡那霉素 

 L1015 LB 固体培养基(干粉) 

 L1020 SOC液体培养基(干粉)  

 X1010 X-gal(20mg/ml)

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