三聚*胺（Melamine）定量检测试剂盒（化学发光法）

六、试剂盒组成

每一个盒中的试剂足够进行 96 个试验（包括标准测定），试剂盒中的组份如下：

1、96孔发光板1块（8孔×12条）：预包被羊抗鼠IgG

2、标准液×6瓶（1ml/瓶）：

0ng/mL、0.1ng/mL、0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL

3、11×酶连接物浓缩液（0.6mL）：辣根过氧化物酶标记的克伦特罗浓缩液

4、11×克伦特罗抗体浓缩液（1.3mL）：鼠抗克伦特罗单克隆抗体

5、底物液A（6mL）：过氧化脲

6、底物液B（6mL）：鲁米诺

7、浓缩洗涤液（25×）（25mL）：含Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBS）

8、缓冲工作液（25mL）：含稳定成分的磷酸盐缓冲液（PBS）

9、其他：封板膜2张，自封袋1个，说明书1份

七、样本处理

处理任何样本，必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。取50μL清亮尿样直接测定，如尿样浑浊3000转离心10min，取上层清亮尿液测定，暂不使用的样本应于-20℃冷冻保存。

八、检测步骤

检测前的准备

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡30min以上。

2、酶标记物为浓缩液。由于稀释后酶标记物的弱稳定性，所以只稀释实际需用量的酶标记物。轻轻摇匀浓缩液，吸取所需数量，用缓冲工作液以1:11（1+10）的比例，稀释11×酶连接物浓缩液（比如：400μL浓缩液+4.0mL缓冲液，足够4个微孔板条用）。

3、克伦特罗抗体为浓缩液。由于稀释后抗体的弱稳定性，所以只稀释实际需用量的抗体。轻轻摇匀浓缩液，吸取所需数量，用缓冲工作液以1:11（1+10）的比例，稀释11×克伦特罗抗体浓缩液（比如：400μL浓缩液+4.0mL缓冲液，足够4个微孔板条用）。

检测操作

仔细的洗涤非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。

1、准备：取出需要数量的微孔板，将用剩的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。将微孔板条插入微孔架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准品和样品的位置。

2、加抗体：每孔加入100μL稀释后的抗体溶液，37℃恒温箱孵育30分钟。

3、洗板：倒出孔中的液体，将微孔架倒置在干净吸水纸上拍打，以保证完全除去孔中的液体。每孔加满稀释后的洗涤工作液，静置20秒钟，甩去液体，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。

4、加标准品/样品：加入50μL标准品或处理好的样品到各自的微孔中，标准品和样品做两个平行实验，然后加入50μL稀释后的酶连接物到微孔，小心地充分混合，37℃恒温箱孵育30分钟。

5、重复3的操作。

6、发光：每孔先加入底物液A 50μL，再加入底物液B 50μL，37℃避光孵育15min。

7、测定：于发光仪上测定每孔发光值。

九、结果判定

（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分发光值率等于标准品或样本的百分发光值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的发光值，再乘以100%，即

B—标准溶液或样本溶液的平均发光值

B₀—0ppb标准溶液的平均发光值

（2）标准曲线的绘制与计算

以标准品百分发光率为纵坐标，以克仑特罗标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分发光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中克仑特罗的实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

十、注意事项

1、严格按照说明书操作时间，每加一种试剂前需要将其摇匀，各操作步骤紧凑进行。

2、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

3、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

4、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

5、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

十一、贮存条件及有效期

贮存条件：2-8℃、干燥避光防潮。

保存期：在正确贮存条件下，有效期为6个月。

 上海裕平生物科技有限公司专业销售各种品牌档次的ELISA试剂盒，品质保证，售后服务完善。并可以免费代检测。服务于高校及免疫学科研单位。技术人员更好的为您服务。
电话021-60545848.或18721526660-18721505559
QQ:2534039683/2394827028
邮箱：yupingbio@126.com