双链腺相关病毒（scAAV）包装技术

一、概述

    腺相关病毒（AAV）属微小病毒（parvovirus）家族的成员，为无包膜的单链线状DNA病毒。AAV的基因组约4700bp，包括上下游两个开放读码框架（ORF），位于分别由145个核苷酸组成的2个反向末端重复序列（ITR）之间。

    基因组中有3个启动子（P5、P19和P40）和2个开放阅读框（ORF），rep和cap，如图1所示。rep编码4个重叠的多功能蛋白，即Rep78、Rep68、Rep52和Rep40，其中Rep78与Rep68参与AAV的复制与整合，Rep52和Rep40具有解螺旋酶和ATP酶活性，与Rep78、Rep68共同参与单链基因组的复制；cap编码的VP1、VP2、VP3、是装配成完整病毒所需要的衣壳蛋白，它们在AAV病毒整合、复制和装配中其重要作用。

AAV基因组结构示意图

将野生型的腺相关病毒基因组初步改造后，可包装形成单链DNA AAV（single-stranded AAV, ssAAV）病毒。

双链AAV病毒（self-complementary AAV,scAAV）是在ssAAV基因组右侧ITR改造后，可包装形成自身互补的双链AAV病毒，基因表达更为快速，表达水平更高。

AAV感染细胞后，需要有一个由单链转变为双链的过程，病毒DNA第二链的合成已被证明是病毒基因表达的限速步骤，直接影响到病毒的感染效率。在scAAV基因组中，右边的ITR删除了一个D序列（包装信号），并且末端解链位点突变（∆trs），它能够阻止Rep蛋白修饰调节解链切口，增强自我互补双链DNA的包装。双链AAV病毒进入细胞后，不需要一个由单链变为双链的过程，可以直接表达，而且表达水平相对较高。非常适合应用在要求目的基因快速表达且需要较高表达水平的基因治疗方案中。

二、scAAV质粒系统

注：scAAV包装容量不能超过1.4kb。

并且百恩维生物有AAV1~9、DJ等10种血清型可供包装选择，能满足客户的各种实验要求。

scAAV穿梭质粒                         scAAV包装质粒

scAAV辅助质粒                               GFP对照质粒

三、百恩维生物scAAV包装技术路线

您只需给我们提供详细的基因信息，选定的所需的血清型，我们就能为您提供高滴度的scAAV病毒，滴度高达1013vg。

另外百恩维生物经过鉴定与质量控制：载体测序鉴定、Q-PCR测定滴度、感染活性测定等，保证给您提供的病毒正确可靠。