DNase I (1 U/μL) 产品说明书

产品概述

DNase I(脱氧核糖核酸酶 I)，即Deoxyribonuclease I，是一种可消化单链或双链DNA的脱氧核糖核酸内切酶，它识别并切割磷酸二酯键，产生5'端为磷酸基团，3'端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。DNase I的活性依赖于Ca²⁺，并可被二价金属离子Mg²⁺、Mn²⁺等激活。在Mg²⁺存在的情况下，该酶可随机识别并切割双链DNA任意一条链上的任意位点；而在Mn²⁺存在的情况下，可识别并切割DNA两条链上几乎相同的位点，产生平末端或有1-2个核苷酸突出的粘末端DNA片段。

产品用途

1.适用于RNA提取、体外转录、RT-PCR实验中DNA的去除。

2.用于足迹法（Footprinting）分析DNA-蛋白质相互作用。

3.与DNA Polymerase I一起用于切口平移（nick translatioin）。

4.DNA随机片段文库构建。

5.细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

单位定义

37℃ 10 min，将能够完全降解1 μg pUC19质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

来源

大肠杆菌重组表达。

保存条件

 -30 ~ -15℃保存。

反应条件

37℃孵育15-30 min。

失活或抑制

加入终浓度为5 mM的EDTA并经过65℃加热10 min。

使用实例

体外转录后去除DNA模板，具体操作如下：

1. 体外转录产物中加入DNase I，每1 ug DNA模板需加入2-4 U DNaseI消化去除。

2. 37℃孵育15 min。

3. 加入终浓度为5 mM的EDTA，65℃加热10 min终止反应。

注意事项

1. 最适pH：7.0-8.0。

2. 活化剂：DNase I需要二价阳离子以达到最大活性。

3. 抑制剂：EDTA, EGTA, SDS。

4. 特异性：降解DNA的双链特异性的核酸内切酶。

5. 使用时将酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃保存。