上海日初生物科技有限公司
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8.1 FQ-PCR 简介:
荧光定量PCR不同于其他PCR是在于在PCR过程中利用荧光染料在光激发下释放的荧光能量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化。荧光信号变量与扩增产物变量成正比。PCR扩增产物越多,荧光信号越强。荧光染料直接结合扩增产物 如SYBB Green I,类似于EB,能特异性地区分单双链DNA,只与双链DNA结合.
Threshold(阈值):PCR扩增信号进入相对稳定对数增长的最下限,通常设定在S型扩增曲线的增长拐点附近。
Cycle Threshold (Ct值):PCR增长信号与Threshold发生交汇的循环数,也是FQ-PCR判断阴阳性和进行定量分析的依据。 CT值越小,说明起始模板量越大,原始样品中待检测基因含量越高。通过比较CT值的大小,即可比较各检测基因的相对含量。
8.2 FQ-PCR实验流程:
核心:首先确定PCR方法,而后确认靶序列,引物,探针序列。
关键步骤:RNA抽提,逆转录
8.3 收费标准和实验周期
PCR方法 |
样品数量 |
收费标准 |
实验周期 |
SYBR Green 染料法 |
1-20个 |
200RMB/样品/指标 |
3工作周 |
20-50个 |
150RMB/样品/指标 |
4工作周 | |
50个以上 |
120RMB/样品/指标 |
5工作周 | |
Taqman
探针 |
1-20个 |
200RMB/样品/指标 |
3工作周 |
20-50个 |
150RMB/样品/指标 |
4工作周 | |
50个以上 |
120RMB/样品/指标 |
5工作周 | |
Taqman MGB 探针 |
1-20个 |
200RMB/样品/指标 |
3工作周 |
20-50个 |
150RMB/样品/指标 |
4工作周 | |
50个以上 |
120RMB/样品/指标 |
5工作周 |
FQ-PCR扩增曲线示例: