微染色质免疫共沉淀(ChIP)试剂-核酸检测-试剂-生物在线
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微染色质免疫共沉淀(ChIP)试剂

微染色质免疫共沉淀(ChIP)试剂

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产品名称: 微染色质免疫共沉淀(ChIP)试剂

英文名称: Snapshot MicroChIP Assay

产品编号: CA-0002

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产品产地: 美国

品牌商标: Signosis

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          染色质免疫共沉淀(ChIP)是一种功能强大的蛋白-DNA互作研究方法。目前常用的ChIP方法的一个缺点是需要大量的细胞(106-107),细胞量少则限制了ChIP的应用。此外,整个ChIP实验的步骤比较繁琐。目前没有一种方法可以在少量细胞中研究转录因子及辅因子的结合。Signosis开发的Snapshot MicroChIP assay试剂盒可用于干细胞、胚胎以及其它细胞量稀少的样本。试剂盒将染色质制备、免疫沉淀反应以及DNA片段收集三大步骤集中在同一管子中完成,以降低样本损失。试剂盒中的试剂可以完成80次反应。
        在基因表达过程中,不仅需要与启动子元件直接结合的转录因子,还需要与这些转录因子相关的其它辅激活因子。相互作用的辅因子整合多个转录因子及通路,形成独特的生物学过程。相对于凝胶迁移实验(EMSA)在体外进行的检测来说,染色质免疫共沉淀(ChIP)实验能在细胞内完成转录因子与启动子序列相互作用分析,研究转录因子及其辅因子在同一时间如何调控单个基因或多个不同基因表达。经过多方面的改进,Signosis的Snapshot MicroChIP Assay可以很容易地检测500-10000个细胞中的蛋白与启动子相互作用关系,且所有的步骤已优化可在一个单独的管子中完成。
 A.原理: 
        ChIP实验通常分为四个步骤:(1)蛋白质与DNA交联;(2)染色质片段化;(3)蛋白质沉淀;(4)靶标识别及鉴定。第一步的交联是要保证形成的蛋白质-DNA复合物在后续实验过程中保持结合状态。甲醛是最常用的可直接结合DNA的蛋白的交联剂,比如转录因子和组蛋白等,但由于短间隔臂的原因对于间接结合DNA的辅活化因子和辅阻遏物作用有限。
        相比一般ChIP试剂盒,SignosisSnapshot MicroChIP assay最大的改进是实验所需的细胞数量由10 6个降至500-10000个,而且所有实验步骤可在同一个单独管子中完成。其它的改进还有:第一,双交联,除了甲醛以外加入另外一种交联剂,确保能够检测到直接结合DNA的转录因子以及间接结合的辅因子;第二,通过MNase消化将DNA破坏形成500bp以内的单核小体,这一改进大大增强了实验的灵敏度和重复性。染色质片段化以后,交联的蛋白质-DNA复合体由特定的抗体以及ChIP级的蛋白质A/G磁珠进行富集。最后一个改进是使用Chelex-100处理一步释放与蛋白交联的DNA片段,代替繁琐的蛋白酶K消化、柱纯化多步法,大大提高实验效率。

B.优势:
只需500细胞
——只需要500个细胞即可完成实验,适用于细胞量有限的样本;
一天即可完成——实验步骤经过优化,一天即可完成全部实验;
单管实验——染色质制备、免疫沉淀反应以及DN**段收集三大步骤集中在同一管子中完成;
综合性强 ——试剂盒适用于组蛋白、转录因子以及辅因子与启动子相互作用研究。

 

产品名称 规格 编号
微免疫共沉淀(ChIP)试剂 80次反应 7137