Y187酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

Y187菌株是GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold, AH109等)通过mating操作进行筛库试验。Transformation Imarxker为: trpl,leu2，报告基因为: lacZ，MEL1。 Y187有两个报告基因: lacZ,MEL1，分别由两种不同的启动子(G1， M1)启动，这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。Y187感受态细胞经特殊工艺制作，pGADT7质粒检测转化效率>10⁴ cfu/ μg DNA。

2.基因型：MAT a，ura3- -52，his3- -200，ade 2-101，trp 1-901， leu 2-3,112，gal4△，met一，ga180△，URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

3.使用说明：

1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg, Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

4.注意事项：

1). PEG在低温下易析出，请在常温下完全溶解后使用。

2).转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3).同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4). Y187酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30°C;高于31°C，生长速度和转化效率呈指数下降。

5).菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板.上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合 成途径受阻;又由于其ADE4,5,6, 7,8基因均正常，所以造成中间产物P- ri bosy lami noimidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6).酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例:涂YPDA平板29°C，48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29°C，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29°C，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29'C，80- 90h培养可见直径1mm克隆。

*本试剂仅供实验室研究使用