DNA 拓扑异构酶 I

产品及特点

DNA Topoisomerase I（DNA 拓扑异构酶 I）来源于小牛胸腺，与来源于原核生物的酶性质不同，在无Mg2+的条件下也具有活性。而且，原核生物的DNATopoisomerase I只作用超螺旋分子的负链，而本酶则能使来源于超螺旋分子正负链均形成松散型，DNA Topoisomerase I催化4种反应：

1. 使环状超螺旋分子的超螺旋解开。

2. 在单链环状DNA分子内形成绳结（Knotting）和解开绳结（Unknotting）。

3. 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。

4. 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应（Catenation）或者逆反应（Decatenation）。

反应条件

1X Buffer+BSA [50 mM KAc，20 mMTris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，1 mMDTT (pH 7.9 @ 25℃)]。加入 100 μg/ml BSA。37℃ 温育。

Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，35 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mMEDTA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25℃

备注

1. pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I（超螺旋分子）用DNA Topoisomerase I反应后电泳，胶中含溴乙锭（EB）时，反应前后DNA带的位置不发生变化。这是因为由DNA Topoisomerase I作用而转换为松散型的DNA受EtBr的影响，再次变为超螺旋状态。因此，使用Topoisomerase I反应后，一般使用不含EB的琼脂糖凝胶电泳，电泳终了后再用EB染色。

2. 如果在10×添附Buffer中直接加入0.1%小牛血清白蛋白溶液，会产生大量的白色沉淀。因此，在反应液调制时需按以下顺序添加试剂：dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。

3. BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。