实验原理

  与化学合成的siRNA和shRNA质粒载体相比，利用慢病毒或腺病毒表达shRNA，一方面可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞，提高shRNA导入细胞的效率，另一方面病毒介导可延长RNAi的时间，尤其慢病毒感染后可以整合到宿主细胞基因组，进行稳转筛选。

图2.4慢病毒介导RNAi原理示意图

技术应用

技术应用基因功能的体内外研究

病理机制研究

实验流程

实验结果展示

图 1 相对定量 PCR 检测 3 组 shRNA 慢病毒感染组相对阴性对照组目的基因的干扰效果

TPOUBLESHOOTING

常见问题 FAQ

Q ：化学合成siRNA，shRNA质粒和shRNA病毒进行细胞实验的优缺点？

Q ：我提供靶细胞为什么需进行预实验？需检测哪些内容？

A ：客户提供的靶细胞进行培养后确定其状态，我们会进行靶基因的表达丰度检测，确认靶基因的表达量，然后采用慢病毒或腺病毒进行细胞的 MOI 值摸索，确认靶细胞用何种病毒预计采用多大的病毒量进行感染实验。若预实验结果表明细胞中靶基因的本底表达本身很低则不建议进行干扰筛选工作。

Q ：病毒介导的RNAi筛选工作公司作何保证？

A：首先预实验摸索客户提供靶细胞的 MOI 值，感染效率达到 80% 以上，从而确定病毒的包装类型。然后设计三个干扰靶点并进行病毒包装工作，感染靶细胞后，我们通过 qPCR 检测，确保至少一个靶点的干扰效果大于80%。实验结束后最佳干扰靶点的腺病毒可根据客户的要求进行扩增；最佳干扰靶点的慢病毒可以根据客户的要求大量包装后提供给客户。

参考文献

1. Buchschacher GL Jr, Wong-staal F. Development of Lentiviral Vectors for Gene Therapy for Human Diseases.Blood2000,95(8):2499-2504.