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通过使用工具病毒载体介导将外源基因导入靶细胞中,对疾病特定基因进行定向和组织特异性的改造,将为肝脏领域的疾病研究与治疗提供强大工具,如肝硬化、肝纤维化等。
首先,肝脏研究如何选择合适的病毒载体
慢病毒、腺病毒和腺相关病毒(AAV)等都是常用的工具病毒载体,在肝脏研究中如何选择合适的病毒工具呢?
1. 慢病毒:慢病毒具有毒性低、损伤小的特点,且病毒感染细胞后,可以整合入基因组长期表达,是细胞实验的首选。应用于在体注射时,引起的免疫反应较为温和。
2. 腺病毒:腺病毒载体容量大,不整合到染色体中,无插入致突变性。但表达时间短,在大部分细胞中,腺病毒可维持7-14 天的表达时间。且免疫原性高,应用于在体注射时易造成炎症反应。
3. 腺相关病毒AAV:AAV 体积小,滴度高,扩散性好,是在体实验的首选。AAV有多种血清型,不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力,其中AAV2型、8型、9型等对肝脏有较好的趋向性。
了解了这些病毒载体在肝脏研究中的优势和不足后,如何根据实验目的来挑选合适的基因操作工具呢?建议您可以从以下这几个方面出发:
1. 工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符;
2. 工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合;
3. 工具载体对目的细胞、在体组织的转导是否足够高效。
常用基因操作工具选择指南
吉凯小建议:
1. 在基因大小允许的前提下,在体实验建议优先选择腺相关病毒(AAV)。AAV具有滴度高,扩散效果好,免疫原性低等特点,且AAV有多种血清型,2型、8型、9型等对肝脏有较好的趋向性。点击了解更多AAV血清型选择小窍门>>
2. 细胞体外感染建议选择慢病毒:慢病毒在感染细胞后2-4 天开始表达,且对细胞毒性低、损伤小。
3. 如需目的基因在肝脏中特异性表达,可使用组织特异性启动子,如肝脏特异性启动子TBG。吉凯提供组织特异性启动子载体的病毒包装服务,点击了解>>
注射方法
病毒工具在肝脏中的的注射方法
肝脏常用的注射方法有尾静脉和肝门静脉注射,两种注射方法用量类似。下面以肝原位注射为例详细说明。
1. 腹部切开后,寻找到肝门静脉:将肝叶提起,下面就是门静脉,因为下腔静脉在后方,离肾脏比较近,所以,一般看到的大的静脉就是门静脉。
2. 注射病毒,穿刺后压迫止血。
用量参考
肝脏注射病毒用量参考
以下表格中注射参数来自吉凯客户发表文献。更多肝脏病毒注射参数,点击查看与下载>>
1. 慢病毒
代表文献(31)吉凯客户文章Jourmal of viology,2016,90(4):1729-1740
2. 腺病毒
代表文献(36)吉凯客户文章Laboratory Investigation,2017,97(9):1020
3. 腺相关病毒
代表文献(37)吉凯客户文章Cellular physiology and biochemistry,2016,40(5):1117