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HPLC分析方法进展

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 自HPLC仪问世以来,其硬件技术、分析方法及应用研究发展迅速。本文仅就在食品化学分析中,HPLC分析技术与应用展概述如下。 

一、HPLC分析方法进展 
● 液-固色谱法(LSC) LSC是根据组分基团对吸附剂表面亲和力的大小,决定了其保留程度。在LSC色谱中应用最广泛的极性固定相是硅胶。 
● 反相色谱法(RPC) RPC是指在非极性固定相上的液相色谱法,固定相多为化学键合相。其代表为ODS。目前,某些极性键合相,如氨基键合相也广泛应用于反相色谱中。反相色谱可分离离子型和非离子型化合物。据统计,在食品化学HPLC分析中,90%以上的分析过程都是反相色谱法。 
● 离子对色谱(IPC) IPC又称为离子对分配色谱,是近年来发展较快的一种色谱技术。目的是应用液-液分配色谱实现对强电解质和弱电解质混合物,或对电解质和非电离物质混合物的分离。IPC根据固定相和流动相的相对极性分为正相和反相方式,但反相IPC应用较多,如氨基酸、多肽、核酸、各种药物、有机酸的分析。 
● 离子色谱法(IC) IC法是HPLC中用于分离分析离子型化合物的方法,按分离机理的不同,IC可分为高效离子交换色谱法(HPIC)、高效离子排斥色谱法(HPICE)和流动相离子色谱法(MPIC)。HPIC主要用于亲水阴、阳离子和碳水化合物的分离;HPICE多用于无机弱酸、有机酸、氨基酸、醛、醇的分离;MPIC可用于疏水性阴、阳离子和过渡金属配合物的分离。IC分析多种阴离子快速、灵敏、选择性好。目前许多国家建立了采用IC法测定水质中阴、阳离子的标准检验法;AOAC已批准四项用于食品分析的IC法。 抗原肽
● 反相胶束色谱法(RPMC) 在反相离子对色谱中,当反离子采用表面活性剂超过一般离子对色谱所用的浓度时(达0.02~0.2mol/L),此时的反相色谱称为RPMC。RPMC分为正反相胶束色谱。特点是具有高度的选择性,有利于梯度洗脱,提高了检测灵敏度。主要应用于血清、尿液中药物浓度测定,其优点是样品可直接进样分析,分析时间短,样液量少,准确度高。 
● 空间排阻色谱法(SEC) 又称为体系排阻色谱法,是利用多孔凝胶固定相,依据分子大小差异来进行分离的方法。根据凝胶性质可分为凝胶过滤色谱法(GFC)和凝胶渗透色谱法(GPC)。SEC适用于需很快提供未知样品分子大小、组成、近似分子量信息。GFC适用于分析水溶液中多肽、蛋白质、核苷酸、多糖等;GPC主要用于高聚物的分子测定。如聚乙烯、聚氯乙烯等精细化工原料。 
● 间接光度液相色谱法 间接光度液相色谱检测技术是一项正在发展中的抗原肽色谱技术,在离子和离子对色谱中都有应用。该法是对于无紫外吸收的样品采用UVD来检测的方法。优点是扩大UVD的应用范围,可用于低响应或无响应的样品。多用于无机和有机阴离子的测定。。 
● 化学衍生液相色谱法 它是采用衍生试剂,http://www.ontoresinc.com/ 借助化学反应给样品组分化合物分子接上某个特殊基团,使其衍生物能够改善分离效果和提高检测灵敏度的方法。可分为柱前和柱后衍生法。衍生试剂有多种,可与胺类、氨基酸、酚、醇等发生衍生化反应。