Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞

中文名称：Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞
英文名称：Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cel
产品规格：10×100μl|50×100μl
Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株聚合了不同原核表达菌株的优势：
Rosetta-gami赋予其Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。
该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，适合 T7启动子诱导的蛋白表达。
该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素，氯霉素，链霉素，四环素抗性，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR，StrR，TetR)
操作说明：
1.取100μl冰上融化的Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42 回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
6.BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
7.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！