NovaBlue(DE3) 感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌NovaBlue(DE3) 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。NovaBlue(DE3)来源于K12菌株，具有极高的转化效率，是转化效率最高的原核表达菌株，可同时用于普通质粒的构建和蛋白的原核表达。

基因型：F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

特点：NovaBlue(DE3)菌株染色体DNA 中整合了λ 噬菌体DE3 区，使得NovaBlue(DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。NovaBlue(DE3)菌株具有四环素抗性，endA1 和recA1 的突变有利于插入DNA 的稳定和高纯度质粒DNA 的提取；lacZΔM15 的存在使NovaBlue(DE3)可用于蓝、白斑筛选转化效率达10⁹cfu/μgDNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，静置冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．感受态细胞最好在冰中缓慢融化，8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

*本试剂仅供实验室研究使用