质谱兼容型蛋白银染试剂盒

中文名称：质谱兼容型蛋白银染试剂盒
英文名称：MS-Compatible Silver Stain for Protein
产品规格：10次
银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的最灵敏的方法，MS(质谱)是确定未知蛋白最常用和最快捷的方法，但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题，其中最主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰，这样MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白质实际的氨基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析，为此本公司开发MS 兼容型银染试剂盒。

产品特点：
1．跟MS 兼容，原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂，所得蛋白质没有发生化学修饰，故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。
2．银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右，可达0.2-0.6ng蛋白质/条带。
3．可用于各种PAGE胶，包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE，尿素-PAGE)，非变性PAGE胶，IEF胶(等电电泳胶)，2D胶等。
4．四种溶液都是现用现配，实验结果的可重复性好。

产品组成：

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

准备工作：
所有溶液均需现配现用。以下按一块PAGE胶需要200mL溶液配制，用户可以根据自己PAGE胶的大小增减溶液的用量。
一、用自备试剂配制400mL固定液(按一次银染需要固定2次计算，每次固定需200mL固定液)
将160mL甲醇、40mL乙酸和200mL去离子水充分混合后即得400mL固定液。
二、配制200mL溶液A
先配制溶液A组分一储备液：将溶液A组分一干粉加入到100mL溶液A组分一溶剂中，充分摇晃溶解即得溶液A组分一储备液。此溶液可以4℃保存。将60mL甲醇、8mL溶液A组分一储备液、1 份溶液A组分二(干粉)和132mL 去离子水充分混合后即得200mL溶液A。
三、配制200mL溶液B
称0.5g溶液B干粉，溶于200mL 去离子水中，充分混合后即得200mL溶液B。
四、配制200mL溶液C
将1 份溶液C(干粉)溶解在200mL 去离子水中(干粉不容易溶解，需搅拌)即得溶液C。注意：使用前还需要再加入160μL溶液C组分二并充分混匀。
五、配制200mL溶液D
将1 份溶液D(干粉)溶解在200mL 去离子水中即得溶液D。

银染：
1．PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。
2．重复上步一次。
3．将PAGE胶转移到200mL溶液A中，室温摇晃30分钟。
4．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
5．将PAGE胶转移到200mL的溶液B中，室温摇晃20分钟。
6．用200mL 去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。
7．将PAGE胶转移到200mL的溶液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。
8．将PAGE胶转移到200mL的溶液D中，室温摇晃终止反应。
9．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
10．切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。

技术资料：
MS前处理步骤(仅供参考)
1．脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。
2．还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。
3．烷化：将胶块或胶条置于55mM 碘乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。
4．原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL 测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。
5．多肽提取：用5%三氟乙酸抽提酶解液，再用2.5%三氟乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)最后溶于0.5%三氟乙酸中。
6．MS分析：参考相关MS仪器使用手册。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！