Optimized Trypsin
with EDTA,without Ca2+ Mg2+
cat:cc17.3 mfd:201902
size:100ml storage:-20
推荐：保种体系试剂
特点：
保种试剂系列，适合较难养类细胞，消化时间稍长，为工业细胞工厂用户开发，后续细胞状态会更好。同株细胞消化时间固定，室温即开即用。无消化过度因素影响。
图片中为293T,无吹打、机械动作分散细胞，图片中是消化3分钟左右，全部是化学作用将成团细胞分散成单个细胞，彩图为293T共聚焦96小时（增强贴壁试剂辅助，国产玻片），稍后用户可查询文献。看我用户图片（一直保密，用户肯定比我共聚焦还要漂亮）共聚焦国产玻片处理后才可以，进口大牌子玻片不用处理(做细胞爬片很多实验室失误在这），关于共聚焦其他细节老师可来信沟通。
推荐细胞：乳腺癌类，卵巢癌类，原代、干细胞、293T、易成片团聚细胞（成片团聚也跟很多因素有关，具体问题具体分析）欢迎各位老师来信沟通，我司对细节及步骤问题常年统计。
原装进口500ML大包装胰酶注意事项，很多老师评价大包装不好用，稀释液一定要用对，购前要跟厂家问清楚拿那种稀释，不一样的稀释液会使胰酶PH有变化，影响细胞实验。
------------------------------------------------------------------------------------------------------
对消化要求较高案例细胞介绍（胰导β细胞、胰腺类细胞消化推荐、B lymphocyte cell 、胰腺原代）建议与讨论，国内实验室养的都不是很顺利。
如后面是长期课题，就上述提几个建议，要是国内库购买，建议按以下给出试剂都可尝试，目的是看看能否将生长慢问题解决。建议先看看能否找到问题关键点。先上手后，总结下这只细胞特点（培养过程中问题我们可讨论），若能解决问题，在后面考虑从ATCC购买或者原代提取，目前觉得消化步骤较重要，我列下试剂，后面您参考用。

消化部分推荐-若有老师有相关经验与技巧，能否列出产品，并告知理由。
Trypsin--建议不用或者低浓度加其他消化试剂结合试试。胰酶对细胞损伤估计很大，这点我们觉得较关键，建议结合列出两个消化混合使用较稳妥，推荐浓度0.05（我们这款表现更优）
理由： the most common being incomplete solubility, lot-to-lot variability, cell toxicity, and cell surface protein/receptor damage.最常见的是不完全溶解、多点变异、细胞毒性和细胞表面蛋白/受体损伤。
Elastase 弹性蛋白酶在胰腺中产生，相对柔和一些。文献常用方案是原代细胞消化：胰酶+胶原酶+弹性蛋白酶
DNaseⅠ由外分泌腺分泌，在胰腺和腮腺中最为丰富。常用是易成团细胞，建议这个试剂先消化。
后面这两个推荐理由是，胰腺类细胞也很难养，β细胞来源胰腺，所以列出。



--B lymphocyte cell 案例细胞成份比较
案例细胞Rat Pancreas 大鼠胰腺 （INS-1细胞)来源成份参考（Hygromycin B --Blasticidin S HCl--Zeocin Selection Reagent ）

ATCC-NAMALWA (ATCC CRL-1432）这个是人来源的β细胞，完全培养基作参考，RPMI 1640 medium with 2 mM L-glutamine adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 4.5 g/L glucose, 10 mM HEPES, and 1.0 mM sodium pyruvate, 92.5%; fetal bovine serum, 7.5%

推荐无血清方案 CC-3211（ B lymphocyte Medium），Recombinant Human Granulocytemacrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) to the 100 ml aliquot of LGM-3™ Medium for a final GM-CSF concentration of 800 U/ml. Transfer 80,000 units of Recombinant Human Interleukin 4 (IL-4) to the 100 ml aliquot of LGM3™ Medium for a final IL-4 concentration of 800 U/ml. Stir until all cytokines are dissolved.

转染前调整细胞状态推荐，消化与促贴壁结合使用，一样培养条件，曾强贴壁试剂增强时间为二十分钟，有相关需求老师可列出目的需求。

普通试剂研发历程：
胰酶统计了六年，推出我们的Optimized Trypsin（下面有产品链接），对胰酶挑剔的细胞有易成团的神经胶质类、肝类、乳腺癌类、胰岛胰腺类、免疫悬浮（这个成团也可通过离心后，加入低浓度胰酶解决团聚）团聚问题不解决，冻存后的细胞团DMSO深入不充分，容易有冰晶形成损伤细胞，导致复苏后状态不理想，成团成片细胞培养过程中中间细胞得不到完全培养基营养吸收。通过反复多家实验室验证，这点可用我们推荐胰酶，常温消化，完全利用化学作用，无机械力消化成单个细胞，俺我们方法与0.25浓度胰酶消化后，吹打散细胞方法冻存后复苏比较细胞成活率，这个成活率高低，也是转染率高低理由。此产品推出后，经用户使用后统计总结目前结论：胰岛胰腺类细胞没有惯例问题，新手培养2020到2021培养胰岛胰腺类细胞系，没碰到BUG，今年准备完成国内库保钟难细胞系：beas-2b HK-2 INS-1 THLE-3，胰酶算是一个基础条件，有准备养这类细胞老师，可来信标明，相关资料可讨论


20211101原料影响因素涨价，老用户价格不变。巨噬类成片特性解决想当出色。
各部位组织器官巨噬开始统计-培养基选择讨论，建系可行性讨论：1；类上皮与组织上皮如何区分-肠道分布。2：骨髓中DC与巨噬如何区分。3：神经胶质与巨噬如何区分。神经类研究老师能否给些胶质与巨噬区别，我们有些胶质细胞系培养统计数据，培养中成片特新有相关一致特点。4：心内：尘细胞，心力衰竭细胞与巨噬的共性。5：疑问：骨髓来源巨噬：如何避免成纤维类淹没巨噬6：增殖与不增殖：大部分观点是不增殖，这类大部分是文献派。细工不同观点：目前培养技术方法试剂等有很大改善-与较早文献比较。对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞；RAW 264.7焦熟悉也统计了多年，国内库用这个细胞验证血清内毒素很准（我们统计大概有十年之久，碰到有特点的血清，这个细胞验证很准，包括现在国外大牌子的血清，普通用户不是很关注，这类细胞一上便知结果。以下列出细胞例如武汉库，昆明库，已有不少建立成功的巨噬类细胞系。各种问题来信都可讨论。

20220121：产品统计结果，最核心是细胞膜无损伤，传代后直接生长，没有膜损伤后恢复期，所以细胞状态会更优，是我们产品特点。
常规量：疫苗生产用细胞工厂、类器官、溶瘤。
超大量：多层板生物反应器、碟片式生物反应器、固定床生物反应器培养消化中，细胞消化时间较长，传统方式不适合，细胞消化前后细胞质量不一致，前面损伤大，后面还没裂解细胞，导致细胞整体质量均一行差，死细胞碎片较多，影响后期目的实验，我们在国内正规库建系原代测试，消化几个小时也没问题，消化形成单个传代后，正常增值生长。超大量培养关于浓缩培养基相关，可关注我们后期推出的维持培养基开发，血清替代（核心全部用国内生产技术，评测标准按进口品牌平行测试为设计标准。结合维持培养基优势，重组蛋白生产相关纯化后期收获蛋白前可换成血清替代品，从细胞质量状态，后期纯化蛋白量，优势很大。北京院校有超大量细胞培养要求用户（实验室空间实现生产中试细胞量相当容易，例如一个固定床生物反应器一个占地几平米的面积，相当几百个10层细胞工厂，我们可配合完成交钥匙前全部评测）


20220207
适用实验
细胞表面标志物分析、病毒生长检测、血清饥饿诱导的休眠检测、通过致癌基因转染的转化分析、神经嵴细胞迁移分析、细胞增殖、细胞趋触性分析、肿瘤细胞迁移分析、常规细胞传代、生产规模扩大（生物反应器）和流式细胞分析使用、自动化培养中消化需容错率较高需求用户（消化与损伤容错率高）

细工该产品在以下细胞应用中，有空泡越来越厉害问题，可用该产品培养一段时间看下效果：成纤维细胞、角质化细胞、血管内皮细胞、肝细胞、血管平滑肌细胞、肝细胞祖细胞、原代鸡胚神经细胞、骨髓干细胞、胰岛胰腺类原代，细胞系、贴壁 CHO 和 BHK 细胞、巨噬细胞、293 细胞、L929 细胞、永生化小鼠睾丸生殖细胞、3T3、Vero、COS、HeLa、NT2、MG63、M24 和 A375 转移性黑色素瘤、神经胶质瘤 U251 和 D54、HT1080 纤维肉瘤细胞和 Sf9 昆虫细胞、人胰腺癌细胞；PANC-1：人胚胎胰腺组织来源细胞；CCC-HPE-2：人胰腺腺泡上皮癌；HPAC：人胰腺癌细胞；AsPC-1：人胰腺导管癌细胞；CFPAC-1：人原位胰腺腺癌细胞；BxPC-3：人胰腺癌细胞；HS 766T：人胰腺癌细胞系；SW 1990：人胰腺导管癌细胞（淋巴结转移）；T3M-4：小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-2D1：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-3E6：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-4B3：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-4C5：大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J：人胰腺癌细胞HPAF-II：人胰腺癌细胞PANC-1：人胰腺癌细胞MIA PaCa-2：人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3：人胰腺癌细胞CFPAC-1：人胰腺癌细胞系SW 1990：人转移胰腺腺癌细胞AsPC-1：人胰腺癌细胞PANC-1：人胰腺癌细胞系；SW 1990：人胰腺导管腺癌细胞；CFPAC-1：人胰腺癌细胞；MIA PaCa-2：人胰腺癌细胞；PANC-1：人胰腺细胞系；HPC-Y5：人源胰腺癌细胞；PAXC-003：人源胰腺癌细胞；PAXC-002：人源胰腺癌细胞；PAXC-010：大鼠胰腺导管干细胞；XMRPDSC2012：中国人胰腺癌原位癌细胞系；HPPS-1：人胰腺癌神经浸润细胞系；HPNI-1：中国人胰腺癌原位癌细胞系；STL-C1：人胰腺癌神经浸润细胞系；STL-C2：人胰腺癌细胞系；BxPC-3 M8：人胰腺癌细胞；CFPAC-1：人胰腺癌细胞；PANC-1：：大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1：大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F：小鼠胰岛内皮细胞MS1：小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6：小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6：大鼠胰岛干细胞；ALLRPISC2012：大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F：人胰岛融合细胞； 1.1B4

该产品已列入保种试剂级别，建议操作步骤按我司说明书，实验后不理想用户，如需参考建议，麻烦列出培养试剂耗材厂家货号，问题详细描述，预期目标。
产品评测统计过程中遇到细胞培养高手较多，与常规胰酶使用方法不同处是我们该品不怕消化过，建议高手先静心，从容操作。


20221108 流式原代筛选参考-保种胰酶消化应用
保种理念：平时要拿难养的细胞，先应用，拿到预期所需目的指标，或者实验结果不理想，提高细胞质量的需求。
推广应用很慢，但是使用过的用户，了解其中缘由的行家都很认可。
给新用户一些用户使用后的技巧分享，细胞培养量超多的量很大的，我们产品优势就来了，保守的说，一次处理十盘以上应该没问题，熟练用户应该几十盘同时处理也不成问题。

流式原代筛选参考-保种胰酶消化应用
流式设备
MoFlo XDP超速流式细胞分选系统
MoFlo Astrios EQ超高速流式分选系统
该设备实验室（协和、北医、清华、北大、脑科学、厦大、南大、浙大）
相关培训资料，巨噬细胞研究分析，原代的应用

讨论-胰酶消化，修复相关因子，方法统计中
细胞筛选中，组织前处理可讨论，问题描述要清晰（描述关键词：离体时间，消化成份，理由）
流式筛选后，培养救助，细胞膜恢复与救助理由参考（经验来自统计：转染后损伤、耐药后损伤、电转后损伤、难养救助经验）结合各类细胞本身特性特点。
描述关键词：离体时间，消化成份，理由？
救助：成分，是否有相关案例应用与经验储备。理由？
问题描述，预期要求。

20230615:
难点：易团聚、成片、冻存复苏活率不高、转染效果差、提升细胞质量、细胞救助、后续实验类器官、依托细胞大量培养后蛋白生产。建系目的等

相关产品及开发思路
培养中解离、胰酶优化解离、无酶解离、EDTA解离、难培养肝、胰岛胰腺对胰酶敏感细胞、上皮、等大面积培养（单层培养，多层培养），大液体培养，细胞工厂，减少消化损伤，提高后面相关试验可行性，特高蛋白产量，超量维持培养。

20240104 胰岛胰腺、肝、肺、脾、肠，原代灌注提取提取法的的，中性酶+DNAase方案替代，我们这款应该更优，特别是胰岛胰泡分离，与胰岛成团分离（包括干细胞消化EDTA法替代），这几种常用替代理由，让细胞状态更加，为后面建系保种等做些储备备份方案参考。关键点，细胞膜无损。

20240323

成团成片阶段总结

2018年开始重点关注成团成片，因来源难养系，上皮，SV40，胶质为主这类问题及工业生产用细胞工厂大面积培养中提升细胞培养质量等需求，深入开发了相关胰酶消化产品，开发要点是细胞膜无损，还要消化成单个细胞，（冻存复苏步骤验证产品的优势及可行性）难转染细胞通过解决成团成片提高转染效率的案例统计，能够大大提升实验预期效果，

23年以来统计了不少类器官培养，成干培养中，免疫细胞、悬浮培养，胰岛胰腺原代中成团成片中问题，说些参考建议，后期验证有效果可来信告知，目的是有效无效不以个别案例说明有效，普遍案例大多数有效才证明可行，成团成片可看成组织内形态状态（分化后维持培养后续在统计讨论），有些共性。原代组织处理，也是消化成单个容易培养（离体后开关通路，较快适应培养体系并生长）成团成片培养相对难，也可理解成2D,3D培养。我们目的很明确的是，原代建系传代培养，在工程用2D培养细胞量会很大（在更大面积培养中细胞质量一致性尤为关键）

组织-细胞
细胞-组织

20240415:建系应用优势，胰岛胰腺原代分离中，细胞与胰泡部分分离，与组织物分离中，组织体内生理特性（主要是离体入皿后，适应中，通路的开关在首代培养中极为重要）胰酶要点是既要充分分离细胞，还要避免细胞膜避免损伤，都要靠适合的胰酶浓度把握，细工做了大量相关细胞系等对胰酶敏感细胞系浓度筛选，开发出容错冗余非常有优势的Optimized Trypsin,工程应用建系应用用户可申请试用比较，邮件联系

20240915

自动化转染应用中，细工冗余试剂开发产品优势-胰酶
1：解决成团成片，团聚问题-转染前优化细胞胰酶优势凸显，容错率高并超长时间消化，没有消化中变缩就终止消化，预实验先行为准。
以成团成片，易团聚细胞为例 NIH 3T3 CHO-K1 HT29，腺癌，免疫类转染前对照组消化后细胞状态通过细工胰酶消化后无损试剂特点，避免常用浓度0.25习惯损伤（镜下细胞变缩后马上终止消化）建议细工胰酶预实超长时间消化验证稳妥，冗余试剂理念在细胞工厂大面积工业应用中，细工就推出冗余理念，对胰酶敏感细胞做了长期统计（细工胰酶篇有详细介绍统计历程，说明书介绍比较详细），自动化如有贴壁不牢、悬浮细胞类，建议目前流行用反转法转染，细工贴壁试剂能进一步提升细胞质量与增加转染效率。成团成片团聚前面都有各类难养细胞系都有详细介绍，具体细胞问题具体分析，可深入讨论。细胞工厂大面积培养，从种子库到规模培养技术储备充足五年以上（工业应用成熟）
2：培养过程添加解离配套试剂

20241105
优化胰酶结合冻存复苏应用参考

冻存前细胞处理（特别是成团成片，易团聚类），细工胰酶对细胞膜无损，化学力消化后成单个状态，在执行冻存复苏程序降温，细胞活率大大提升，各类特点不一（免疫类团聚，神经胶质类团聚，腺类团聚）随各有各的特性，也有些总体规律性，例如上清回输，适合大部分团聚成团成片，要结合含血清无血清培养特点。