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细胞增殖检测
细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础,是细胞最基本的生理活动。
百恩维可提供MTT法以及CKK-8法细胞增殖检测服务,检测细胞存活和生长 。该法灵敏度高、经济有效,且可应用于生物学和医学等多种研究领域,例如判断药物、外源性基因、细胞因子等对于细胞的作用,明确上述因子对于细胞生物学行为的影响(如细胞活力、增殖、凋亡等方面),是目前检测细胞增殖的主要方法。
MTT法检测原理
活细胞进行生命活动需要能量,而线粒体是能量转换生成ATP的重要场所,线粒体内膜呼吸链上的重要的酶-琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH)可被视为线粒体的标志,因此细胞内琥珀酸脱氢酶的活力间接显示了该细胞的活力。琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢,脱下的氢能将四甲基偶氮唑盐(MTT)还原成蓝紫色的甲臜(formazan)颗粒。甲臜颗粒被有机溶剂如二甲基亚砜溶解后呈现的颜色深浅可通过酶联仪测出光密度值,通过光密度(OD)值可比较不同实验组内细胞的相对存活率。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比,从而可以对细胞的活力、增殖与凋亡情况进行检测。
CCK-8法检测原理
CCK-8法与MTT法检测原理相似,细胞活性检测试剂中含有WST-8,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
CCK-8法和MTT法的区别
|
CCK-8法或称WST-8法 |
MTT法 |
1 |
还原后的Formazan是水溶性的 |
还原后的Formazan是非水溶性的 |
2 |
重现性好 |
由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan,故有时重复性略差 |
3 |
操作简便 |
操作繁琐 |
4 |
测定波长:450~490nm |
测定波长:550~600nm |
服务流程:
1. 实验方案设计与确认
2. 细胞培养与接种
3. 细胞处理与检测
4. 数据分析
5. 实验报告提交,包括实验原始数据及分析结果
细胞样本运输说明:
如客户提供细胞进行试验,可选择以下寄送方式
1) 细胞样本以干冰运输;
2) 细胞样本直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);
服务周期:
服务内容 |
实验周期 |
细胞培养 |
1周 |
MTT法/CCK-8法测定细胞增殖 |
1~2周 |
实验报告整理 |
0.5周 |