一、石蜡包埋

1. 取材

l 固定要及时  主要取之于活组织检查标本、动物模型组织标本、解剖标本均为新鲜组织夹取标本时用无齿镊以免对组织造成人为损伤，如机体死亡2h以上的组织可能有不同程度的自溶，其抗原可能发生变性、消失或严重弥漫现象，因此需要快速固定处理以免影响免疫组织化学标记效果。

l 刀具要锋利  防止人为因素影响切取标本是应用锋利的刀剪。

l 大小适宜  一般标本取的组织块厚度约为0.2~0.3cm，可根据性的略作调整，大小以1.5cm*1.5cm*0.2~0.3cm为宜，应于免疫组化的组织以1cm*1cm*0.2cm为好，不要太大，以免浪费试剂。

l 速度要快  取材时间要短，一些特殊的组织取材前要先灌注，比如脑组织。

l 特殊处理  取材应避免取过多坏死组织或凝血块，组织上如果有血液、粘液、粪便等污物要先处理干净在取材，以免影响后期切片。

2. 组织固定

l 适宜的固定液  固定组织是要注意固定液的量，一般情况下要求固定液的量应为组织的10倍以上，大标本不少于8倍。

l 适宜的时间  大多数组织应该在固定24h内（不超过48h）进行取材，脱水，如果固定时间过长会影响后续实验的结果（如免疫组化、免疫荧光，分子生物学、细胞遗传等）。

l 适宜的取材  根据组织快的大小决定固定时间，一般厚度不超过0.3cm的情况下固定时间为3-24h（如果组织固定好未及时脱水处理应保存在70%的酒精里）。

l 适宜的容器  固定的容器要相对大一些，防止固定后的组织大于容器难以取出，造成组织结构的破坏。

l 特殊组织的固定  肺、脂肪组织在固定的时候要用纱布或棉花把组织压住，让组织漂在固定液中间，得到充分的固定；胃、肠、皮肤等剖开的组织要先压平在固定；脑组织要先灌注再取材。注：所有的组织后期如果要做免疫方面的实验尽量先灌注，以免红细胞太多影响实验结果的判读。

二、石蜡切片制作流程

1. 取材：新鲜组织固定于 4%多聚甲醛 24h 以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内；

2. 脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精 1h-85%酒精 1h-95%酒精 1h-95%酒精 1h-无水乙醇 I 1h-无水乙醇 II 1h-二甲苯Ⅰ 1h-二甲苯 Ⅱ 1h-蜡 I 1h-蜡 II 1h；

3. 包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框，于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4. 切片：将修整好的蜡块，放入-20℃冻台冷却，再将冷却的蜡块置于石蜡切片机切片，厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，载玻片将组织捞起，60℃ 烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

三、HE染色实验步骤

1. 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗；

2. 苏木素染细胞核：切片入 Harris 苏木素染 3-8min，自来水洗，分化液分化数秒，自来水冲洗，流水返蓝；

3. 伊红染细胞质：切片入伊红染液中染色 1-3min；

4. 脱水封片：将切片依次放入75%酒精 30s-85%酒精 30s- 95%酒精 I 1min -95%酒精 II 2min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ7min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干， 中性树胶封片；

5. 显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果判读：细胞核蓝色，细胞质红色。