T1 Phage Resistant感受态细胞

货号：C1220

规格：10×100ul / 20×100ul

保存：-70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月。

产品简介： 本公司生产的 TI Phage resistant 化学感受态细胞经特殊工艺制作,可用于 DNA 的化学转化。使用 pUC19 质粒 DNA 检测,转化效率高达 109cfu/ug DNA 以上。

基因型: F-φ80(lacZ)△M15△lacX74hsdR(rk,m)△recA1398endAltonA

特 点:TI Phage Resistant 感受态细胞是目前生长速度最快的感受态细胞,在氨苄青霉素平板上，8-9 小时可见克隆； 用于蓝、白斑筛选，12 小时可见蓝斑；将过夜培养的单克隆在 2ml 的 LB 培养基中培养 45 小时即可进行小量质粒 提取；适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增，减少克隆 DNA 同源重组的发生,提高质粒 DNA 的产量和质量；具有 T1，T5 噬菌体抗性。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分 之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。

3、将离心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 180rpm 振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关 的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可 根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取 100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA 总量较少， 可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养 液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下 的菌液再涂布新的平板。

注意事项：

1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降 低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。

5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。