线粒体膜电位检测

1. 线粒体膜电位：是维持线粒体进行氧化磷酸化、产生三磷酸腺苷的先决条件, 膜电位的稳定有利于维持细胞的正常生理功能。

2. 检测方法：JC-1荧光探针法（荧光显微镜观察）、流式检测

线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6

（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。　　

一、方法

将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1 （1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。　　

二、注意事项

1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。　　

2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。 荧光探针JC-1是一种阳离子型的亲脂性染料，能够自由穿过细胞膜，随细胞膜电位的变化而在膜两侧保持动态平衡。其特点是线粒体膜电位低时浓度低，主要以单体形式存在，488nm激发时最大发射波长为527nm，呈绿色荧光，胞浆相对线粒体为低电位，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性；膜电位高时浓度高形成聚集体，488nm激发时的最大发射波长为590nm，红色荧光。活细胞线粒体膜电位高，线粒体内JC-1聚集体的浓度高，红色荧光很强，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性，而凋亡细胞则大多为FL1单阳性。

线粒体膜电位检测-流式法

线粒体膜电位检测-免疫荧光法

结果展示

JC-1荧光探针法（荧光显微镜观察）

流式检测线粒体膜电位

实验周期及交付标准

1. 实验周期：2-3周

2. 交付标准： 荧光显微镜拍照：荧光图、荧光比值、实验报告（实验步骤、试剂、仪器） 流式检测：流式检测图、比值、原始数据、实验报告（实验步骤、试剂、仪器）

需确认的信息

1. 样本的种属及类型（组织还是细胞）

2. 样本数量

3. 是否提供探针

4. 拍照要求、分析要求

收费标准/服务周期/提供结果：

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