BL21(DE3)感受态细胞说明书
货号：C1400
规格：10×100ul / 20×100ul
保存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
产品简介： 本公司生产的BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107，-70℃保存6个月转化效率不改变。
基因型：F_ ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）
特 点：该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）
1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。 2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。 3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。 4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项： 1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。 2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。 3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。 4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。 5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
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