产品内容：

提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体9mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂二：液体50mL×1 瓶， 4℃保存；

丙酮酸钠标准液，1mg/ml：液体1mL×1瓶， 4℃保存。

产品说明：

丙酮酸通过乙酰CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。

丙酮酸与2,4-二**苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二**苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、 丙酮酸提取：

1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

3、 血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议取0.1mL 血清（浆）加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

4、 标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0mg/ml。

二、 测定步骤：

1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。

2、 取300μL标准品或样本+100μL 试剂一于1.5mL EP 管中，混匀，静置2min，加入500μL 试剂二，混匀，于520nm 波长处测定吸光值A。

三、 丙酮酸含量计算：

1、 根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；y为丙酮酸钠含量（μg/mL），x为吸光值。

2、 按照血清（浆）体积计算

丙酮酸含量（μg/mL）= (y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×10

3、 按照蛋白浓度计算

丙酮酸含量（μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

4、 按照样品质量计算

丙酮酸含量（μg/g 鲜重）= (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W

5、 按照细菌或细胞密度计算

丙酮酸含量（μg/10⁴ cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）= y÷500

V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

 相关文献:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影响因子: PMID:30453281