T4 RNA 连接酶 2 （双链RNA连接酶 ）

产品及特点

T4 RNA 连接酶 2 ，也被称为 T4 Rnl-2（ gp24.1 ），同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与 T4 RNA 连接酶1不同的是，T4 RNA 连接酶2 对双链 RNA切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA 的末端连接。该酶连接时需要相邻的 3´ 羟基与 5´ 磷酸基。同时该酶也可用于连接双链结构中 RNA 3´ 羟基和 DNA 5´ 磷酸基的切刻 。它具有下列特点：

1. 连接粘性末端接头

2. 连接双链 RNA 中的切刻最佳用酶

3. 可用于 DNA/RNA 杂交链中，RNA 3羟基与 DNA 5 磷酸基的连接

4. 无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。

反应条件

1X T4 RNA Ligase 2 反应缓冲液 [ 50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃), 2 mMMgCl2, 1 mM DTT,400 μM ATP ]，37℃ 温育。

单位定义

1 单位指 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内完全连接 0.4 μg 的 23-mer 和 17-mer RNA 等摩尔混合物所需的酶量。5´-GGGCUUUGCGUGGGUUU-3´3´-CCCGAAACGCACCCAAAGAUAUCp-5´退火后底物将形成如下的双链 RNA 分子，随后用此酶进行连接。5´-GGGCUUUGCGUGGGUUUpCUAUAGAAACCCACGCAAAGCCC-3´3´-CCCGAAACGCACCCAAAGAUAUCpUUUGGGUGCGUUUCGGG-5´

Buffer成分

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，35 mM (NH4)2SO4，0.1 mM DTT，0.1 mMEDTA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25℃

参考文献

(1) Ho, C.K. and Shuman, S. （2002） Proc. Natl.Acad.Sci. USA, 99,12709–12714.

(2) Ho, C.K. et al. （2004） Structure, 12, 327–339.

(3) Nandakumar, J. et al. （2004） J. Biol. Chem., 279, 31337–31347.

(4) Nandakuman, R. and Shuman, S. （2004） Mol. Cell., 16, 211–221.