TG1 Electroporation-Competent Cell

产品规格: TG1 Electroporation-Competent Cell 50μl×5 pUC19 (control vector, 10pg/μl) 10μl [F´ traD36 proAB lacI qZ M15] supE thi-1 (lac-proAB) (mcrB-hsdSM)5(rK–mK–) TG1 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。TG1 来源于 E. coli K-12 菌株，是目前生 长 速度最快的克隆用大肠杆菌菌株，在平板上 37℃，7 h 可见克隆。主要的噬菌体展示用菌株，同时也 可用 于普通质粒的构建，lacIqZ M15 的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验；但不含核酸酶 endA1 突 变，体 内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙 醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中 静 置 5 分钟充分降温。2. 取-80℃保存的 TG1 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬， DNA 浓度不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受态。3. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。 4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 1ml 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪 吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到 50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 锥形离心管等），向离心管中 补 加 S.O.C. 培养基至 10 ml。倾斜 45 度放入摇床，37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。 6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。