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生物活性
产品描述
GW788388是一种有效的，选择性的ALK5抑制剂，IC50为18 nM，也抑制其他TGF-βI型和II型受体激酶活性，但不抑制BMP II型受体。
靶点
ALK5
 
 
 
 
 
IC50
18 nM [1]
 
 
 
 
 
体外研究
GW788388在细胞实验中具有抗TGF-β活性，IC50为93 nM。[1] GW788388抑制活化素II型受体，但是不抑制骨形态形成蛋白(BMP)II型受体。4 nM到15 μM GW788388作用于Namru小鼠乳腺(NMuMG), MDA-MB-231, 肾脏细胞癌 (RCC)4, 和 U2OS 细胞没有细胞毒性。GW788388抑制TGF-β诱导的Smad 激活，且抑制靶点基因表达, 降低上皮-间叶改变和纤维发生。GW788388抑制 ALK5, ALK4, ALK7 和TGF-β调节的生长。[2]
体内研究
GW788388 作用于鼠，显示出适当的药物动力学谱(血浆清除力小于40 mL/min/kg，半衰期大于2小时)。GW788388按10 mg/kg剂量作用于puromycin氨基核甙诱导的肾脏纤维化模型，明显诱导胶原A1 mRNA 表达达80%。[1] GW788388 按2 mg/kg剂量作用于患晚期糖尿病肾病鼠，减少TGF-β 信号，且有效降低纤维发生。[2]用GW788388处理心肌梗塞(MI)鼠，明显降低收缩功能, 且降低激活的Smad2, α-SMA,和胶原 I。 GW788388 作用于心肌梗塞(MI)鼠，也降低心肌细胞肥大。[3] GW788388按 2mg/kg剂量作用于注射bleomycin的动物，降低纤维反应 。[4]
特征
 
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
激酶实验: [1]
ALK5荧光偏振结合实验
GW788388与ALK5结合，测定纯化的重组GST−ALK5。用不同浓度GW788388置换罗丹明绿色荧光标签的ATP竞争性抑制剂，测定结合的pIC50。GST−ALK5加到含62.5 mM N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸) (Hepes), pH 为7.5, 1 mM二硫苏糖醇(DTT), 12.5 mM MgCl2, 1.25 mM 3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸(CHAPS), 及1 nM 罗丹明绿色标签配体的buffer中，使最终ALK5浓度为10 nM 。 40 μL酶/配位剂加到含1 μL 不同浓度GW788388的384孔板上。使用 LJL Acquest荧光检测系统读数。通过Acquest计算每孔的荧光偏振，然后输入到曲线拟合软件，构建浓度—反应曲线。
测定ALK5抑制剂抗TGF-β活性的细胞实验
在转录实验中测定GW788388作用于HepG2细胞的活性。细胞稳定转染萤光素酶基因驱动的PAI-1启动子。与对照组相比，在荧光素酶活性对TGF-β刺激反应上提高10到20倍。测定W788388抗TGF-β活性，细胞按每孔3.5×104个细胞接种在96孔板上，孔中含200 μL 血清培养基。然后板置于37oC下5% CO2 环境下24小时。GW788388溶于DMSO。温育过夜，细胞用PBS冲洗，然后加入10 μL 裂解缓冲液溶解。测定与对照组相比的荧光素酶活性，作为测定GW788388活性的指标。构建浓度—反应曲线，测定IC50值。
细胞试验: [2]
细胞系
Namru鼠乳腺细胞(NMuMG), MDA-MB-231, 肾脏细胞癌(RCC)4, 及U2OS细胞
浓度
4 nM 到15 μM
处理时间
72小时
方法
用GW788388处理72小时后，测定细胞存活力和细胞增殖。
动物实验: [1]
动物模型
患二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝脏疾病或氨基甘嘌呤霉素诱导的肾脏纤维化的Sprague-Dawley鼠
配制
溶于4% DMSO和96% [0.5% HPMC/5% Tween-/20%HCl(1 M)，溶于NaH2PO4 (0.1 M)]混合物
剂量
3或10 mg/kg
给药处理
口服饲喂
溶解度
30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol, 30 mg/mL