T4 DNA连接酶

中文名称：T4 DNA连接酶
英文名称：T4 DNA Ligase
产品规格：40000U|200000U
本酶可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5-P末端和3-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA 连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。

用途：T4 DNA Ligase常用于DN**段和载体、linker或adaptor等的连接。也可以用于缺刻修复及Ligase介导的RNA检测。
来源：本T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of
lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5-DNA termini concentration of 0.12 μM (300 μg/ml)。200U等于1个Weiss unit，以Weiss unit计，本产品共200单位。
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和***酶，不含RNA酶，满足常规连接反应要求。
酶储存溶液：20 mM Tris, pH 7.5, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。
10×Ligation Buffer：400 mM Tris, pH 7.8, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP。
失活或抑制：65℃孵育10分钟可以导致T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl浓度大于200mM时强烈抑制T4 DNA Ligase。


T4 DNA Ligase连接产物转化感受态后涂板LB平板的效果如上图，本品的连接产物转化感受态细菌后涂板获得的LB平板效果图。A. 双酶切后的载体自连过夜；B. 双酶切后的载体与待插入片段过夜连接。

注意事项：
1. 对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后再进行电转。
2. 需进行平端连接或快速连接时，推荐使用快速DNA连接试剂盒。T4 DNA Ligase可以进行平端连接，但效率较低。
3. 普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在65℃孵育10分钟使T4 DNA Ligase失活，以避免T4 DNA Ligase和DNA结合导致的条带位置迁移(band shift)。

储存条件：-20℃。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！