服务简介          

根据给定GeneID或DNA序列以及点突变信息，在点突变位置附近设计3个sgRNA，合成正负Oligo DNA，构建载体质粒，通过测序验证载体是否构建成功。根据点突变的信息，构建包含突变位置及2侧各2000bp左右的Donor载体。验证待点突变的细胞的单克隆生长能力、药杀浓度、转染条件、载体效率。完成以上工作后，将最高效率的载体与Donor载体共转染待点突变的细胞。转染后进行药杀，之后通过有限稀释进行单克隆的分选。最终通过测序验证是否得到点突变细胞系。

    技术信息          

1. 基因点突变

Cas9系统使目标区域的基因组断裂，利用基因组自身的修复机制，将外源突变位点（两端包含同源臂）通过同源末端重组的方式与基因组中原位点替换，获得稳定遗传的一种技术。

2. 基因敲入技术特点

2.1 通过将基因点突变的个体或细胞与正常的个体或细胞相比较，研究者可以揭示特定基因的功能。
2.2 在基因组水平上将目标基因修改或变成无效等位基因，遗传背景干净清晰，是研究基因功能的金标准。

3. CRISPR/Cas9技术与RNAi技术的比较

3.1 CRISPR/Cas9技术优势
（1）在基因组水平上编辑目标基因，高度模拟目标模型。
（2）遗传背景干净清晰，多次重复实验结果更稳定。
（3）技术热点高增加文章的影响力。
3.2 RNAi技术的缺点
（1）仅部分抑制该基因的功能。
（2）在转录后（包括翻译）水平上下调基因表达，非基因组水平上的彻底改变！
（3）会出现每次实验间的误差。
（4）非特异性强；脱靶效率高（Smith et al., 2017. Evaluation of RNAi and CRISPR technologies by large-scale gene expression profiling in the Connectivity Map. PLoS Biol 15(11): e2003213. )

     蓝盾优势          

1.特有的检测手段可大大缩短服务周期
2.可同时进行支原体检测以及目标细胞株的STR鉴定
3.若实验未按预期完成，技术费用全免！
4.相邻的10bp内多位点的突变与单一点突变价格相同

      蓝盾服务     

 客户只需提供GeneID——基因分析以及细胞状态评估———构建载体——细胞转染——单克隆筛选——目标基因点突变的细胞株的获得