B834(DE3)感受态细胞 B834(DE3)Chemically Competent Cell

产品规格: B834（DE3） 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F - ompT hsdSB(rB - mB - ) gal dcm met (DE3)  B834 是 BL21 菌株的父系菌株。该系列宿主菌是蛋氨酸缺陷型，可以用来高水平，高特异性 的使用 35S-蛋氨酸和硒代蛋氨酸标记目的蛋白，进行蛋白质晶体结构研究。B834 宿主菌也是 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型菌株。 DE3 是溶源性的λDE3, 所以带有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET 系列载体，及其他 T7 启动子系列载体。 1. 取 100μl 冰上融化的 B834（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或LB 培养基上。基 因 型 简 要 说 明 操 作 说 明 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1.  感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-40mM 均可）。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。