20230905

临床级别PBS原料已下线，进口包装瓶，常年稳定供应，水级别应比注射级稍高。价格100元/1L保种建系推荐。统计理由阐述较繁琐，大牌子该类产品，十几年一分不降。

各地市销冠，为配合优质长期完美销售，细胞培养问题可来信告知讨论细节（问题沟通需全部细节，试剂方法，老师技术背景经验）POTOCOL提供参考讨论可行性，平时问题积累与解决是提供优质试剂最好的案例。

细工方向是原代建系相关稳定体系试剂开发。

推荐：保种体系试剂
适合：正规库来源细胞，协和库，上海库，武汉库，ATCC来源
我司筛选细胞：乳腺癌类，肝癌类，卵巢癌类，原代，胰岛胰腺类，免疫悬浮类，ATCC来源。
推荐用户筛选细胞：raw264.7理由，内毒素不达标的血清，细胞分叉长角，后期又增无减，高质量血清培养细胞成圆形，细胞透亮，增殖正常。该株具体问题具体分析。沟通技术问题可来信告知，来信要求：原装进口体系试剂耗材，细胞来源清晰，细胞培养详细描述，问题详细描述。因细胞培养影响因素众多，环境，二氧化碳，试剂，手法等众多因素，描述清楚后，我们会给出建议方案。
悬浮类：THP-1经典的免疫细胞，经几年统计总结，这只细胞建议反复冻存复苏后一代以上成功，才能说明试剂体系稳定，悬浮培养具体问题可来信沟通。
鼠类来源细胞一般对试剂要求较高。
以上问题沟通前提：进口试剂耗材，细胞来源清晰。国产试剂耗材暂不涉及统计。

国内细胞状态统计一些小建议-血清
高质量的血清：应该是细胞出现问题能解决问题，并能持续保证质量一贯性。
与很多老师意见：其他细胞都能养活，就这个细胞养不好。正好相反，建议评审条件正好相反。如能长期关注这种问题，筛选出的血清质量结果也是最可靠的，就像我们出现问题能想到的那款血清，为啥这款血清能够完成几乎所有问题解决，几十年质量一致性，批间差几乎为零。这种血清才是高质量血清。
欢迎与常年从事细胞质量要求高的实验室一起解决各种问题，目前技术、试剂、设计、方法已相对成熟。国内从从细胞建系开始的技术试验已经非常成熟了，我司目前目前跟踪统计的原代细胞建系思路设计及实验已经有几年了，真正的成熟还要做很多的工作。我司十年的基础实践统计，欢迎您的参与与提携。

2019-目前血清分装后污染问题多，统计方法分享
解决办法，原瓶与分装放四度两个星期以上时间比较浑浊度，能说明是本身质量问题还是操作分装问题引起的，纠纷不是目的，找到问题才是关键。
欢迎各位老师反馈意见建议。
祝商家生意兴隆
祝老师实验顺利

20240607
种子库试剂-维持培养意义
培养基、血清、耗材、手法
维持培养天数比较实验，培养基、血清、耗材、手法
培养基
对比各种生产技术工艺中（球磨、锤磨、高速气流粉碎、针磨）。稳定性，批间差、产能应用有非常积极意义，细工通过生产中各类问题统计解决，推荐种子库级别试剂，国产体系备份用。
细胞系建系，从细胞源头开始，到整个培养体系全部国产备份。长期各种问题统计中，统计内容全部共享验证可行性。前面统计各种难养系，在后面类器官应用中已有些效果，为更好沟通重点并快速验证效果，统一理念非常重要。
血清：通过问题解决筛选,如做细胞汇合实验验证，可讨论普通血清与种子库血清差别。培养中问题统计还比较全面，难养系，原代，类器官，PDX等难点痛点都有理论支撑及案例统计说明，培养理念一致的，如找不到厂家支持，文献支持的，我们给些建议参考。
耗材：国产较多，厂家要能公布详细参数，对产品提升质量有大意义。
技术手法：难养细胞特性特点，解决问题为主，成团成片、传代后消化不下来等，要能整体看这类问题，还是能找到些共同特点，具体问题具体分析，可讨论，细工给些参考建议。
冻存复苏：坚持传统DMSO方案，总结更优解决思路，对冻存复苏挑剔细胞可详细讨论。
上述经典案例，可看下增强贴壁试剂介绍噬斑十日现案例图片。
同行路过建议：纯国内体系建系合作，我司负责问题统计，及解决思路方案完全共享，目的是为建系顺利及反复多家同时验证做些技术储备，人才储备，兽用疫苗应用建系可讨论沟通，含血清细胞工厂应用容易些，建系成本可控，技术可控，人才长期储备。

解离培养基
货号：ECAK-004
规格：1ml
细胞类型：易团聚，易成片，贴壁细胞驯化成悬浮细胞含血清方案，原代细胞组织块解离。
使用：100X 即用试剂
是否是肿瘤细胞：适用各类细胞

案例细胞：HEP G2易成团，后续影响细胞状态，加入试剂后，解决成团问题后，细胞增殖培养状态明显有很大改观。有兴趣老师如准备这只细胞，建议来信告知血清等级。稍差血清对细胞的影响，不是解离培养基可解决的。

原代组织细胞：
组织离体后，建议最快手法入皿（建议四十分钟内），让解离培养基发挥作用，并及时得到完全培养基营养。成功率会更稳妥。组织消化过夜的方法的老师，建议可按我司推荐方法重复实验。推荐我司Optimized Trypsin 产品替换：胶原酶、ACCUTASE等过夜消化产品。
若有感兴趣老师，可来信标注：原代细胞解离关注，我司后续统计进展可定期发送。

20230323 悬浮培养皿应用解决肺，悬浮细胞（腺，神经）售后补充，常规量用法，效果不明显，细胞状态差，经查资料后，建议
悬浮皿建议问清楚厂家悬浮皿所用原理，营养成份拖起细胞使细胞团聚厉害，琼脂与甲基纤维素方式，建议参考以下文献，胰酶与胶原消化效果不理想，传代需EDTA方法，加该试剂建议备量试下，
参考文献
Chen G., Gulbranson D.R., Hou Z., Bolin J.M., Ruotti V., Probasco M.D., Smuga-Otto K., Howden S.E., Diol N.R., Propson N.E., Wagner R., Lee G.O., Antosiewicz-Bourget J., Teng J.M., Thomson J.A.(2011) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8(5):424–429.
关键词：
Essential 8 Medium PSC StemFlex protocol somatic cell reprogramming of CD34+ blood cells
组织来源细胞系悬浮特性，易成球特点的（含腺 神经特点）
讨论沟通：细胞、问题、操作前后详细描述，目的需求。

20230326 细胞传代需EDTA方法开始统计，欢迎各种提问，我们以含血清细胞工厂为基础讨论为主，无血清建议告知尽可能多的资料，大厂标准比较稳妥。国内研发生产尽量全部细节沟通（国外比较成熟的技术了），相关讨论邮件联系。附件是公开的potocol ,我们给出参考。也是基于国内常见问题统计给出的建议。

20240919

原代建系处理参考，建议无外力（化学力，机械力），冰上处理组织后，直接入瓶培养（皿与瓶差别很大，在增殖不顺利问题统计，黑点，生长过慢，成瘤不稳定组几个难点统计过程中，评价培养体系后，瓶培养可以1-4周后恢复到较好状态（皿开放式空间太大，二天以上培养过程中，PH变化大，瓶可避免该类问题）无外力培养后，原代组织到细胞也可4-7天传代（具体问题具体分析，超过这个时间的，建议上述做备份组或预实验，含血清，上清回输，组织必须因子等可讨论方案）能够顺利生长后，在做后面建系准备（或上简易单克隆法，也可反复单克隆，保证是目的细胞纯净，并STR验证），在做病毒感染建系，建系后，可通过简易单克隆法，反复筛选出成堆较快组，提升优化建系后增殖速度。
冗余理念试剂提出，通过难养细胞，难养类共性问题，开发出容错性高，可执行性强，已有三年以上工业生产应用统计，目前在自动化转染设备应用问题中拿到几个关键性问题，试用效果理想。

细胞反向驯化，贴壁驯化成悬浮，悬浮驯化成贴壁，2017年增强贴壁试剂正式列装后，就对该应用开始通过解决问题结合，成团成片成堆解决后，转染效率提高，冻存复苏活性提高。

冗余理念提出，都是为建系目的，解决痛点难点，为建系做充足技术储备,为自动化培养，转染等高通量实验做，易行，积极准备，解决问题先行，可行后，大胆放心实行。
增强贴壁试剂
转染试剂
优化胰酶
冻存复苏优化推荐
解离培养基
简易单克隆

自动化培养，转染配套冗余试剂开发。

人造肉，类器官，外泌体：建系，干方案，精准SOP配套冗余试剂自动化。

20240926

冗余研发路径，对国内常规培养体系了解并深刻理解，就是难点痛点都要试错，通过试错并统计找到可能解决问题的最优路径。
经历历程：难养类细胞问题统计，黑点，生长慢，成瘤不稳定细胞问题统计，冻存复苏细胞活率统计，难转细胞特性，转染试剂研发方向，简易单克隆建系中优势等，都是为国内建系做足技术储备。
例如：
就转染后死细胞过多，细工在培养基，血清方面做些技术储备。
转染后的细胞对培养基PH要求更高，我们生产专门对该项指标做严格控制，可做预实验比较，如果能达到满意预期效果，这个培养基在救助死细胞过程中起到关键作用，也为自动化应用提前做相关技术储备。
该问题来源：二倍体系（WI-38，MRC-5,原代问题常年统计，工业应用中二倍体培养体系普通实验室较难达标，常规系容错能力很高，长期培养后，也会形成培养室自身特点。建议实验室库有纯国产培养体系备份，并长期验证。
血清：种子库级别试剂，我们平时验证对标国内正规库来源细胞长期验证，特别是较难养的（各类难养的乳腺，肝，胰岛胰腺，免疫类系长期验证），转染后死细胞过多方法，建议按原指标血清用量提升5%，更多营养补充，救助转染过程中损伤救助。
耗材：以上验证尽量用进口耗材，难养系分类较多，各有各的特性细节都可讨论沟通，建议给出原始细胞图片，现细胞图片，培养体系厂家，货号。都会得到细工全套免费试用小包装验证。
就自动化培养，转染，细工简易单克隆方法可共享potocol,及后面问题可讨论，讨论前细胞生长特性，准确的目的需求要沟通。

20240930

解离两个拓展案例参考

难转染细胞系，免疫类，原代类，成团成片处理后，提高转染效率，团，球体只有外面细胞接触到转染试剂，中间的细胞接触不到，所以影响转染效率，该问题在冻存前提前处理，配合膜无损优化胰酶，复苏后也可提升细胞活率，这类细胞免疫类，腺类，神经类，胶质类，上皮类，SV40,成团成片都会有这类特点。原代类建系，细工配套要点宣传，高滴度病毒生产，参考增强贴壁试剂案例介绍（原代建系中，也会用到该方法）

20241008

自动化应用配套-冗余试剂
解决实际问题，易重复，反复控制，更多非线性自动化发展冗余试剂容错调整，细胞驯化培养等，简易单克隆种子库种子高精准筛选。
目前头部公司已有，自动化培养，转染、核酸（DNA，RNA）就我司执着后面建系目的开发痛点问题统计，也开发些冗余试剂细胞培养重点，该试剂特点是来自难养中问题统计，如培养中（黑点、生长慢）常见问题中都有些小成绩，痛点问题给出参考技术储备，后面也可选择细工提供统一案例验证细胞，试剂，技术手法，还可通过问题实战解决评价，预期效果展现，比较说明可行性。
我们只做科研阶段讨论，中式涉及的问题我们也有兴趣统计，理论上我们案例细胞思路就是配套自动化目的，案例细胞容错能力来自问题统计与应用，适合二倍体工业应用自动化理论上已讨论通过，几个小品列下优势及特点，胰酶、增强贴壁试剂，转染试剂。
胰酶：对细胞膜无损，各种胰酶敏感细胞常规培养，种子库验证案例多，293每个实验室都用，我们胰酶可同时加几十盘同时处理，细胞工厂工业案例培养面积广，都可随手验证，因培养涉及因素较多，进口国产体系，预算影响等其他因素需建议意见的，我们也可提供参考建议。
增强贴壁试剂：救助冻存后复苏不活案例已开始统计，7年统计中，救助案例还比较少，预计后面这种问题可能会更多，（新品化学成分对细胞的影响，后面有可能会统计）蛋白增产，超长维持培养是这款产品特点，后面具体问题具体分析讨论，产品链接介绍了我们产品案例历程。
转染试剂：结合自动化应用，毒性小，反复转染十几次，反复控制，对难点问题有明显机器优势，难转的痛点问题大质粒，可设计几个小质粒同时反复转染，也是给这种大质粒解决问题的一个思路。

优势简述
细工优势在自动化细胞培养中，冗余试剂为重点方向，维持培养有明显优势，封闭系统减少污染，高通量易重复，常规问题能解决，痛点问题有突破。统计问题一直做，
自动化相关，DNA,RNA可来信注明您司优势，需案例细胞验证邮件注明。国内试剂研发生产，建议参与建系合作，优势是自己体系的细胞系很能说明试剂水准，细胞工厂结合含血清自动化，目前优势大。容易实现，痛点问题都可先讨论及验证。
以减少手动处理引起的变化，并在高通量分析中获得可重复的结果。高通量应用，如敲除研究或靶筛查，通常包括细胞转染。
建系中：无外力影响，含血清培养优势可行性高，无血清开发成本高，先不参与，培养中问题还是积极统计，没有问题就没有研发。血液类细胞低速离心筛选统计开始。
二倍体工业应用：纯国产体系备份，产品，技术，增强贴壁试剂统计历程，难点痛点各种问题都有涉及，各种难养系技术统计储备，可做灵活穿插及长期验证
一次性大容量转瓶为大规模细胞培养，我司促贴壁微球案例图，是静止培养后贴壁细胞，需优化可标明细节先讨论可行性。(微载体/转瓶/摇瓶/滚瓶）

封闭系统解决优势一次性技术自动化应用。
生物生产/细胞培养/细胞生长/干细胞研究/细胞生产/疫苗开发-维持培养优势
药物发现/3D细胞培养/癌症研究/基因组学/蛋白质晶体学/蛋白互作用/疫苗研发-细工结合建系，单克隆种子库，含血清细胞工厂结合自动化，高通量，封闭系统
化学/有机化学

相关应用

工业案例统计-工业
生产痛点是可扩展性、自动化、模块化类型灵活性，以及所有这些因素如何影响上市时间和生产成本
蛋白质到抗体再到核酸生产，产品成功实现生物反应器接种和大规模悬浮培养
生物分子大规模生产
冻存可以使细胞进入真正的悬浮休眠状态，最大限度减缓细胞衰老和进化，从而为生物库研究应用提供更均匀的细胞群。
病毒载体在基因和细胞治疗中的应用在各种疾病中研究，质量控制过程中对基因治疗产品进行质量和安全控制的需要，以确保其进入临床试验阶段
疫苗研发行业工作，成为动物健康领域细菌和病毒疫苗的生物工艺科学家，负责扩大规模，并与制造工厂进行技术转让。
行业痛点最关心的一些是可扩展性、自动化、模块类型灵活性，以及所有这些因素如何影响上市时间和生产成本。
单独控制细胞内的混合体积，病毒载体在基因和细胞治疗中的应用在各种疾病中研究，质量控制过程中对基因治疗产品进行质量和安全控制的需要，

细工免疫细胞建系，科研
造血单核细胞（PBMC）、CD8+细胞。CD3+细胞，抗生物素药物辅助，逆转录病毒的生物素来选择CD8+细胞
分离单核细胞，低速离心方法统计开始，无外力（机械力，化学力），含血清建系，转染感染建系痛点讨论，
CD3+细胞的方案符合生物素抗淋巴瘤
大规模扩增干细胞/MSC/pbmc/MSCs/间充质干细胞的长期培养，生物素化抗体偶联物筛选
测量微升液滴溶液中纳米颗粒（NP）的尺寸和浓度
血液制品中分离和收获可编程体积的靶细胞群。可定制的过程编程、将样品自动分离到三个腔室中以及用于细胞分离的高灵敏度红外传感器可确保一致、可靠、高效、高回收率的结果。
从蛋白质到抗体再到核酸生产，利用细工生物冗余试剂工艺和细胞培养产品成功实现生物反应器接种和大规模悬浮培养或贴壁细胞工厂培养。
如衰老、癌症、传染病等。

20241105

类器官，售后统计应用参考与讨论

无血清方案成团成片消化参考：用户悬浮培养无血清培养体系，消化备份方案参考（无动物源成份要求）
1：EDTA单独消化
2：培养过程中解离培养基
3：无酶消化液。
后面具体问题具体分析，就无酶消化后，细胞呈糨糊状分析，是无血清方案后培养特性，细胞缓冲能力弱，一是营养耗尽后，细胞马上呈现弱化现象，避免应考虑提前换液，无血清大部分厂家还是研发为主，替代血清还有待提高。无酶理论上对细胞损伤很小，结合无血清，要考虑细胞缓冲能力。

就以上问题，细工方案，先含血清大量培养后，在上无血清会好很多，充足细胞量是摸无血清条件不错的方案，细胞冻存复苏也涉及研发过程较重要环节，可就具体案例细胞讨论，种子库、工业应用，临床样本研究，对冻存复苏挑剔各类问题汇总统计中。