来源:缺血再灌注

模式动物品系:SD大鼠，SPF级，健康，雄性，体重：200g~220g

实验分组:对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组

实验周期:24hrs, 72hrs

建模方法:

1.选取体重250g-300g大鼠，行术前12 h禁食，自由饮水。

2.15%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后将大鼠平躺在手术台上胶带固定四肢，将大鼠腹部至剑突术区剃毛 ，用 10％碘酒和75％乙醇术区消毒。

3.取腹正中切口1cm，打开腹腔，小心分离出肝脏左、中叶之肝蒂（左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉）。

4. 用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉，使约70%的肝脏缺血，以防止发生严重肠系膜静脉淤血。0.5min后，与非阻断的右叶相比，肉眼可见阻断叶明显变白，说明阻断成功，用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔，同时将大鼠放在37℃恒温加热垫上保温。

5. 完成持续缺血60min后，重新打开腹腔，迅速取出血管夹，恢复缺血肝血流，0.5min左右可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功，逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔，完成手术。待大鼠清醒后放回饲养室饲养，密切关注大鼠的状态及生存状况并做好记录。

6. 术后分别于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h处死大鼠，下腔静脉取血1ml，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。采用全自动生化分析仪检测血清中ALT（谷丙转氨酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）的水平。同时统一取肝左叶组织1．5cm×1cm×0．2cm留作病理标本或分生标本。

注意事项:

1.分离肝门时用棉签分离，可避免对肝脏的损伤

2.术前禁食有利于手术进行

3.阻断血流要一次成功，否则会造成缺血预处理，减轻损伤程度

4.再灌后用棉签轻轻按压肝脏，有利于血流恢复

5.取材时镊子不要损伤肝脏

应用:疾病模型

模型评价:

肝脏缺血损伤评分：

0分：无肝细胞损伤

1分：轻度损伤，特点为细胞质空泡化，病灶核固缩

2分：中度损伤，血窦膨胀，细胞溶质空泡化，细胞边界模糊

3分：中度到重度损伤，凝固性坏死，大量血窦膨胀，红细胞渗出到肝锁，嗜伊红细胞增多，中性白细胞着边（附着于血管壁）

4分：严重坏死，失去肝脏结构，肝索崩解，出血，嗜中性粒细胞渗入

组织病理学:

取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24h后脱水，包埋，进行石蜡切片后行HE染色，tunel染色。作坏死评分。肝小叶结构严重破坏，网状纤维支架塌陷，肝细胞坏死，空泡变样，肝细胞索、肝窦充血肿胀，边界不清，周围有炎性细胞浸润。

标志因子水平:

分别检测术后0h、3h、6h、12h、24h及72h大鼠血清中ALT（谷丙转氨酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）的水平。