慢病毒包装服务

目前常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒和慢病毒。逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色体上，只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可以长期表达等显著优点。慢病毒不产生任何有效的细胞免疫应答，可作为一种体外基因运输的工具。慢病毒载体介导的转基因表达能持续数月，且无可观察到的病理学现象。

重组慢病毒载体构建：英茂盛业采取第3代4载体系统构建重组慢病毒载体，包括重组慢病毒基因表达载体包装服务、重组慢病毒miRNA干扰载体包装服务、重组慢病毒shRNA干扰载体包装服务。

1、重组慢病毒基因表达载体。我们可以使用将目的基因克隆到CMV, C-Fos, PGK, EF1a和MPSV, Ubiquitin等启动子下游。目的基因与载体中包含eGFP基因的共表达以便于监控宿主细胞的侵染情况。

2、重组慢病毒miRNA干扰载体。采用CMV、EF1a或PGK启动子启动miRNA转录和表达。 载体中同样包含eGFP基因，可以随时监测对宿主细胞的侵染情况。

3、重组慢病毒shRNA干扰载体。采用H1或U6启动子启动shRNA的表达。

重组慢病毒制备：重组慢病毒制备和简单的逆转录病毒制备相似。我们采用four-plasmid方法瞬时共转染293FT细胞制备重组病毒载体：包装辅助结构（HIV gag-pol, rev, and tat），包膜质粒（env）和慢病毒转移载体。转染细胞温育培养48-72小时以让慢病毒颗粒释放于细胞培养液中。将细胞培养液过滤并超速离心浓缩，通过和GFP共表达的转染细胞的FACS分析、荧光显微镜分析或定量PCR预测病毒的滴度。

重组慢病毒载体特性：一般慢病毒载体是通过30×150mm细胞培养皿制备获得的。
滴定浓度：1×10⁷～1×10⁸TU/ml
最终体积：1 ml纯化后的病毒液（储存于PBS）
储存：批量储存的最佳条件为-80°C。   

我们将采取分步收费的方式，即按照所提供的构建，重组，包装，扩增及纯化的一系列不同的服务，根据客户的实际需要，对每项服务进行具体的核算。客户如需检测其目的基因表达所需费用另行核算。