产品信息
产品名称
产品编号
规格
外观
储存
价格（元）
JC-10 线粒体膜电位荧光探针
40707ES03
1mg (2 mg/ml)
溶液
-20℃避光保存
680.00
JC-10 线粒体膜电位荧光探针
40707ES08
5mg
红色粉末
-20℃避光保存
2763.00
产品描述
线粒体膜电位荧光探针JC-10是JC-1的升级产品，同样可用于检测线粒体膜电位的变化。因JC-1虽然在许多实验中被广泛应用，但是其水溶性很差，即使在1 μM浓度的条件下，JC-1也会在水的缓冲液中析出。而JC-10具有更好的水溶性，可以在某些需要高浓度染料的实验中替代JC-1。
正常细胞内，JC-10选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的红色荧光聚合物（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10由多聚体转变为单体形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525nm）。JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。这两种颜色的变化可以用流式细胞仪上的标准滤光器检测到，绿色荧光可用FL1通道分析，红色荧光可用FL2通道分析。除了用于流式细胞术，也可以用于荧光成像和荧光酶标板检测平台。
在一些细胞系中JC-10有着比JC-1更好的表现。不过，JC-10的性能表现极具细胞依赖性特征。
产品性质
化学名称（Chemical name）
5,6 -Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide; Enhanced JC-1;
分子式（Formula）
C25H27Cl2IN4
分子量（Molecular Weight）
583.34
纯度（Purity）
＞95%（HPLC）
外观（Appearance）
红色粉末
溶解性（Solubility）
溶于DMSO
荧光光谱
（Fluorescent spectrum）
单体形式（monomer form）：Ex=490 nm, Em=525 nm
聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=540 nm, Em=590 nm
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。粉末-20℃干燥避光保存，至少一年有效。储存液分装成单次使用量，-20℃干燥避光保存，避免反复冻融，约一年有效。
使用方法
1工作液配制：
1）JC-10粉末（5 mg）：直接加2.5 ml DMSO到粉末内，室温颠倒混匀使其充分溶解，即得到2 mg/ml（约3 mM）的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃，避光干燥，避免反复冻融。
2）JC-10储存液（1mg in DMSO）：本品是JC-10的DMSO储存液，浓度为2 mg/ml（约3 mM）。使用者需要根据单次用量来分装，-20℃避光干燥，避免反复冻融。

3）工作液配制（现配现用）：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他缓冲液（pH 7-8，含0.02% Pluronic® F-127）配制成10-30 μM 1×工作液。涡旋混匀。
注：对于某些细胞，在pH 8情况下可能会阻止JC-10渗透入细胞。
2 JC-1染色步骤（荧光酶标仪）
1）细胞准备
A贴壁细胞：细胞培养过夜使其密度达到2×104~8×104 cells/well/90μl（96孔板）或者5×103~2×104 cells/well/20μl (384孔板)。
B悬浮细胞：离心后重新将细胞悬浮在培养液中1×105~2×105 cells/well/90μl（多聚赖氨酸包被的96孔板）或者2.5×103~5×104 cells/well/20μl (多聚赖氨酸包被的384孔板)。 实验前800 rpm离心2分钟。注意：不同的细胞系需要根据具体情况优化凋亡实验用的最佳细胞密度。
2）用实验药物（10 μl 10×化合物）处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡（例如，用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。空白对照（只有培养基不含细胞）中加入相同量的药物。 注意：药物处理前没有必要清洗细胞。但是，如果药物对血清敏感，可在加入药物前吸掉培养基和血清因子。然后加入等量体积的HBSS溶液到孔内。或者细胞直接培养在无血清培养基内。
3）加入100 μl/孔（96孔板）或25 μl/孔（384孔板）JC-10工作液。
4）37℃，5% CO2孵育15-60 min。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次实验建议优化体系。



5）直接进行荧光变化检测，记录Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光值，然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。
（可选）或者，吸除JC-10工作液，加入100μl /孔（96孔板）或25μl/孔（384孔板）HHBS，再进行后续的荧光酶标仪检测。
3 JC-1染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）
1）养细胞过夜使其在药物处理以诱导凋亡时的密度为：5×105~1×106 cells/ml。选择实验药物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡（例如，用camptothecin