【产品介绍】 以特定酶自组织块分离出原代间充质干细胞是常见的细胞培养技术。ACF高效原代间充质干细胞分离液利用数种重组表达的消化酶制备而成，无动物源成分。ACF高效原代间充质干细胞分离液针对组织的细胞外基质而设计, 不含胰酶，不会伤害细胞。可以有效地消化细胞外基质，进而从组织块 (脐带、脂肪、胎盘) 分离出大量的原代间充质干细胞，作为后续细胞增殖使用。

【预期用途】使用AF高效原代干细胞分离液由组织块(脐带、脂肪、胎盘)分离出间充质干细胞，提供后续培养增殖。

【主要组成成分】由数种重组表达、无物动源的酵素和培养基组合而成。

【适应范围】收获目标组织(脐带、脂肪、胎盘)的原代干细胞,以做细胞体外增殖培养。

【使用方法】（以脐带组织为例）

1. 将脐带用DPBS (BI, Cat#02-023-1A) 漂洗干净，剪成1-50px大小，剔除血管。

2. 将组织块剪成3-5mm3，移入50ml离心管，再加入适量的分离液。

* 一条长度10公分的脐带建议加入10ml的分离液；或者组织块 : 分离液（vol）= 1:1。

** 视情况而定，可自行在分离液中添加1%青链双抗(BI, Cat# 03-031-1B) 。

3. 把50ml离心管横放在37度细胞培养箱，过夜反应（16小时）。

* 若总反应体积较大，也可持续旋转混合。

4. 加入和分离液等体积的0.05%EDTA（BI, Cat# 03-015-1B）终止反应后，1500 xg离心5分钟，去除上清。

* 溶液比较浓稠，小心不要影响下层的细胞; 建议留下5ml左右的溶液。

** 若是脂肪组织，没有粘稠的情形，以常规的200-300 xg离心即可。

*** 没有EDTA, 可使用无钙镁DPBS取代；此时建议后面步骤6多重复2-3次，以确实去除酵素。

5. 以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，500 xg离心5分钟，去除上清。

6. 再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。

7. 用适量的培养基重悬细胞后，即可按常规细胞培养方法接种P0代细胞培养。

* 消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到10,000/cm2以上；传代后即可按常规的接种密度培养 。

【使用方法】（以皮下脂肪组织块为例）

1.    将新鲜的皮下脂肪组织块以DPBS (BI, Cat# 02-023-1A) 漂洗干净，剔除明显的血管或血块。

2. 组织块剪成3-5mm3，移入50ml离心管，再加入适量的分离液。

* 1克组织块加入约5ml分离液

** 视情况而定，可自行在分离液中添加1%青链双抗(BI, Cat# 03-031) 

3. 把50ml离心管横放在37度细胞培养箱，反应4小时 (用户也可自行调整反应时间)。

    * 若总反应体积较大，也可使用旋转混合仪器。

4. 加入和分离液等体积的0.05%EDTA（BI, Cat#03-015-1B）终止反应后，250 xg离心5分钟，去除上清。

* 没有EDTA, 也可使用无钙镁DPBS取代。

5. 以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。

6. 再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。

7. 用适量的培养基重悬细胞，再以100目的筛网过滤细胞液后，即可按常规细胞培养方法接种细胞培养。

* 消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到10,000/cm2以上；传代后即可按常规的接种密度培养。

资料下载：AF高效原代干细胞分离液说明书