TOP10化学感受态细胞产品描述

本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸ cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

TOP10感受态细胞基因型：F-mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Str^r) endA1 nupG

TOP10化学感受态细胞产品组分

运输与保存方法

干冰运输。

TOP10感受态细胞-80℃保存，pUC19质粒-20℃保存。有效期半年。

注意事项

1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

TOP10化学感受态细胞使用方法

1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。

3）将离心管置于42℃水浴中放置60-90 s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3min，该过程不要摇动离心管。

4）向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。

5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。

【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。