产品内容： 
提取液：60mL×1 瓶， 4℃保存； 
试剂一：液体 5 mL×1 瓶， 4℃保存； 
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，现配现用； 
试剂三：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂四：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存
产品简介： 
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与 乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+ /NADH 之间互变。 LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二**苯肼作用生成丙酮酸二**苯腙，在碱 性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。 
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和 蒸馏水。 
 
操作步骤： 
一、样品测定的准备： 
1. 细菌或培养细胞：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10 4个）：提取液体积 （mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
2. 组织：
按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
3. 血清（浆）样品：直接检测。 
 
二、测定操作： 
1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。 
2. 样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
10
10
试剂一
50
50
试剂二
10
 
蒸馏水
 
10
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min
试剂三
50
50
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min
试剂四
150
150
充分混匀，室温静置 3min，450 nm 下测定吸光度，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对 照管。
 
 LDH 活力单位计算： 
A、用微量石英比色皿测定的计算公式如下： 
1. 标准条件下测定的回归曲线， y = 0.725x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。 2. 血清（浆）LDH 活力的计算 
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
 LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10 3=92×ΔA 
3. 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算 
（1） 按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =92×ΔA÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。 
（2） 按样本鲜重计算： 
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 
LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =92×ΔA÷W 
（3） 按细菌或细胞密度计算： 
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.184×ΔA÷W V1：加入反应体系中样本的体积，0.01 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL； T：反应时间，15 min；Cpr： 蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500 万。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。 
 
B、 用 96 孔板测定的计算公式如下： 
1、 标准条件下测定的回归曲线， y = 0.3625x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。 2、血清（浆）LDH 活力的计算 
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 
LDH（U/mL）=ΔA÷0.3625÷T×10 3=184×ΔA 
2、 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算 
（1）按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.3625×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =184×ΔA÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。 
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 
LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =184×ΔA÷W 
（3）按细菌或细胞密度计算： 
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.3625×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.368×ΔA÷W V1：加入反应体系中样本的体积，0.01 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL； T：反应时间，15 min；Cpr： 蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500 万。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。
 
相关文献：
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《Ablation of caspase-1 protects against TBI-induced pyroptosis in vitro and in vivo》 作者:Wei Liu, Yuhua Chen, Jiao Meng, Minfei Wu, Fangfang Bi, Cuicui Chang, Hua Li & Liangjun Zhang  期刊:Journal of Neuroinflammationvolume 影响因子:5.7 PMID:29458437
《Effects of Quercetin on Proliferation and H2O2-Induced Apoptosis of Intestinal Porcine Enterocyte Cells》 作者:Zhigang Chen , Qiaoling Yuan , Guangren Xu , Huiyu Chen , Hongyu Lei  and Jianming Su 期刊:Molecules 影响因子:3.06 PMID:
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《Down-regulation of miR-320 exerts protective effects on myocardial I-R injury via facilitating Nrf2 expression.》 作者:Zhu XA, Gao LF, Zhang ZG, Xiang DK. 期刊:Eur Rev Med Pharmacol Sci 影响因子:2.721 PMID:30840298