北京亿鸣复兴生物科技
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★服务描述:
真核生物染色质主要是由组蛋白和缠绕组蛋白上的DNA组成。此外,为了维持染色质正常功能,染色质还结合了多种功能蛋白,其中包括基因转录相关转录因子、表观遗传修饰相关蛋白,染色质重塑相关蛋白等。染色质通过这一类结合的蛋白来改变染色质结构,调控基因表达。
染色质免疫共沉淀技术(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP)是一种研究蛋白质与DNA相互作用的纪典实验。在活细胞状态下使用甲醛固定蛋白质-DNA复合物,通过超声和酶切将复合体随机切断为一定长度范围内的染色质短片段。再通过目的基因抗体获得蛋白质-DNA此复合体,特异性地富集与三的蛋白结合的 DNA片段。对获得的DNA片断进行纯化,使用Real-timeqPCR、二代测序等技术获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
这项技术可以研究活细胞内与目的蛋白相结合的DNA信息以及蛋白质-DNA互作后的生物学功能。此外将ChIP与第二代测序技术相结合的ChIP-Seq技术,还能够高通量的在全基因组范围内检测目的蛋白互作的 DNA区段。ChIP是研究体内组蛋白、转录因子、表观遗传相关蛋白与DNA广泛相互作用的方法,对干整体筛选目的蛋白在基因组上的结合靶点,药物作用靶点、DNA损伤及修复以及寻找表观遗传对染色质的影响提供了重要的研究思路和方向。
★服务应用:
1、体内研究调控 DNA 序列结合调控蛋白质;
2、Reverse-ChIP 技术结合 LC-MS 可高通量筛选未知结合调控蛋白类型;
★服务内容:
构建相关真核表达载体,转染细胞并获得表达;
基于抗体的免疫共沉淀以及免疫印迹的检测。
★服务结果展示:
★需要提供的信息:
按照ChIP实验要求进行前处理且保存良好的样品
按照Western blot要求保存的样品(-80保存)
能够进行IP的目的蛋白抗体,公司提供空白或者阴性同种属IgG对照
启动子序列信息,靶基因序列和突变位点序列等相关序列信息
ChIP检测试剂盒
★服务结果提供:
1、DNA probe(labeled) :核苷酸序列、标记类型;
2、Reverse-ChIP:样本(根据需要);
3、LC-MS:质谱图、搜库结果;
4、Western blot:扫描图、灰度值;
5、实验报告(材料、仪器、方法、结果、结论)
★服务说明:
客户应确保所供的实验材料的正确性,如基因模板或表达质粒本身具有碱基突变,由此造成的实验延误或其它经济损失均由客户承担;
由于细胞中蛋白在不同生理条件下,会有结构以及功能差异,因此客户需提供抑制剂或者其它条件处 理的细胞裂解液;
各种蛋白的丰度和表达水平在不同细胞差异很大,表达量过低的蛋白可能得不到免疫共沉淀的结果;
免疫共沉淀使用的抗体可由客户提供,抗体请保证能够用于免疫共沉淀,关于载体的构建以及Westem Blot检测请参考其它部分的服务,多个蛋白的检测分次计费。