产品介绍：

Frdbio® His标签蛋白纯化试剂盒用于纯化各种表达系统中含有His标签的重组蛋白，包括大肠杆菌表达系统、哺乳动物表达系统、酵母表达系统等等;本试剂盒配备了纯化蛋白所必需预装柱及核心试剂。

本试剂盒中预装柱的填料为Ni Beads 4FF。主要优势如下：

本蛋白纯化试剂特点：

Ø  Ni Beads 4FF纯化可以耐受变性剂，在高浓度尿素和盐酸胍里仍然可以挂柱，纯化包涵体不是障碍；

Ø  洗脱条件温和，不会对蛋白造成造成损伤；

Ø  填料再生简单，反复使用，实验室测试表明再生15次后，Ni Beads 4FF填料效率没有明显降低。

产品主要参数：

基质：交联度4%琼脂糖凝胶

载量：>40mg His标签蛋白

介质微球粒径：45-165um

最大流速：300cm/h

试剂盒已经提供材料：

其他需要自备试剂材料：

²  待纯化蛋白样品；

²  移液器及吸头；

²  去离子水；

²  0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

产品储存

储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS

储存温度：2-8℃

产品使用操作：

1.使用前准备

1）缓冲液的准备

基础缓冲液:

按照实验所用量，取试剂盒中浓缩基础缓冲液，加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液；

洗脱液:

按照实验所需用量，取试剂盒中浓缩洗脱液，加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱液；

缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

2）样品准备样品

使用上述基础缓冲液制备上样样品（细胞/细菌裂解液），样品在上样前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，防止堵塞柱子。

3）Frdbio® Ni Beads 4FF纯化柱的准备

取出试剂盒中预装柱平衡到室温，打开纯化柱底部开关，用3-5个体积去离子水冲洗柱床，随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子，确保柱床无气泡。

2.从样品中纯化目标蛋白

1）使用蠕动泵上样或者直接上样（重力法）；

上样量不要超过柱子的结合能力。

2）上样完毕后，用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要10-15个柱体积）；

3）使用洗脱液洗脱目的蛋白，顺次接收并做好标记，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要5-10个柱体积）；

4）SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品（包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品,纯化样品根据后续实验进行透析浓缩等。

3.纯化柱清洗、再生与保存。

1）5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗；

2）3倍柱床体积的去离子水清洗；

3）5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液；

4）3倍柱床体积去离子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。

仅供科研实验使用