TOP10F`感受态细胞 TOP10F` Chemically Competent Cell

产品规格: TOP10F 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F´{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1araD139 ∆ (ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG  TOP10F`菌株来源于 TOP10 菌株。 将 F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子转入 TOP10 菌株，即为 TOP10F`。 该 F`因子携带 lacIq 抑制子，可抑制 trc，tac，lac 等启动子下游基因的表达，从而可以用于一些表达毒 性蛋白质粒的扩繁。 recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。TOP10F 可用于构建克隆，蓝白斑筛选（如用于蓝白斑筛选，需在培养基中加入 IPTG 诱导 β-半乳糖苷酶基因的表达）实验，具有四环素抗性。  High5TM系列 TOP10F`感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率>107cfu/μg。1. TOP10F`感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA （质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 25 分钟。 2.42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应 抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱 12-16h，时间过长会产生假阳性小菌落。 1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时 间 过长，长时间存放会降低转化效率。 2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。