质粒小量提取试剂盒II(250preps)
产品名称： 质粒小量提取试剂盒II(250preps)
英文名称： Plasmid mini kit II
产品编号： PD1213-03
产品价格： 0
产品产地： 美国圣地亚哥
品牌商标： Biomiga
更新时间： null
使用范围： null
Biomiga（中国）
- 联系人 :
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- 邮编 : 201109
- 所在区域 : 上海
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- 邮箱 : tech@biomiga.com.cn
试剂盒组分：
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Catalog# |
PD1213-02 |
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Preps |
100 |
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ezBind Columns |
100 |
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Buffer A1 |
50 mL |
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Buffer B1 |
50 mL |
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Buffer N1 |
60 mL |
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Buffer KB |
60 mL |
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DNA Wash Buffer* |
2 x 15 mL |
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Elution Buffer |
30 mL |
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RNase A (20 mg/mL) |
5 mg
(250 µL) |
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User Manual |
1 |
保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
- 使用前请将适量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇终浓度为80%
- 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer
- 若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
- 若用于提取1-4 mL的菌落，请将Buffer A1, B1, N1的量降低至250 µL, 250 µL 及 350 µL，DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不变。
操作步骤：
- 接种新鲜的单个菌落到5-12 mL的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时（勿超过16小时）。室温下10,000 rpm离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
- 加入450 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
- 加入 450 µL Buffer B1, 轻轻地反转多次至溶液充分混匀，室温静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入550 µL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
- 将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
- 小心吸取700 µL离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“7”至全部上清离心过DNA柱。
- 可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（确保已加入无水乙醇），室温下，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“8”。
- 将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
- 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入100~150 µL（体积>100 µL）的ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置2分钟，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。将洗脱液再加到柱的中间，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。
操作流程：
