产品说明
唾液酸是N或O取代的含九碳的酸性糖衍生物的总称。这类糖中最常见的一种是N-乙酰神经氨酸(NANA)。唾液酸广泛分布在哺乳动物的组织和体液包括血清之中。唾液酸寡糖具有抗病毒的能力，它还能够影响血液的凝固和胆固醇水平。在体液中唾液酸浓度也是诊断癌症的重要指标。简单、直接的唾液酸含量检测手段是最为理想的。本公司生产的唾液酸测试法采用了改进的沃伦方法，即唾液酸被氧化成酰基丙酮酸，再与巴比妥酸反应生成粉红色产物。其颜色强度(549 nm) 或荧光强度(lem/ex = 585/555 nm）与样品中的唾液酸浓度成正比。
产品特点
灵敏、准确：只需60mL 样本，测试范围：比色法5 ~1000 mM，荧光法 0.5 ~ 100 mM。
产品用途
直接检测血清、血浆、唾液、牛奶和生物制剂中唾液酸的含量。
试剂盒组成(96孔板供100 份检测)
显色剂:      6 mL      
氧化试剂: 10 mL
10% TCA: 5 mL 
水解试剂: 10 mL
DMSO:    12 mL  
标准品: 500 mL 10 mM 唾液酸
储存条件：室温运输，标准品在-20°C下保存，其余试剂在室温下保存。保质期3个月。
预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
96孔板比色法测试步骤
1. 标准：使用前，须将试剂放置至室温。将25 mL 标准和 225 mL 蒸馏水混匀，配成1000mM唾液酸标准。按照下表比例，用蒸馏水稀释标准品。
No
标准品 + dH2O
Vol (mL)
唾液酸(mM)
1
     100mL +     0mL
100
1000
2
       60mL +   40mL
100
  600
3
       30mL +   70mL
100
  300
4
         0mL + 100mL
100
      0
 
取4支做标记好的Eppendorf试剂管，将20mL 标准分别加入到每个管中，再分别加入 5 mL 10% TCA。
 2. 样品处理：为测定唾液酸总含量(TSA)，需按如下方式将样品水解：将20 mL 样品, 40 mL 蒸馏水和 40 mL水解试剂在试剂管中混匀。在80°C下加热 60分钟，冷却后加入25 mL 10% TCA, 遥匀并离心10分钟(14000 rpm)，取上清液 25 mL 加到试管中并标记为 “TSA”。
    为测定游离的唾液酸含量(FSA), 直接将40mL 样品和 10mL 10% TCA混匀，离心10分钟(14000 rpm)，取上清液 25 mL 加到试管中并标记为 “FSA”。
3. 氧化：按如下比例为每个试管配备工作试剂：将15 mL水解试剂、50 mL 蒸馏水和 65 mL 氧化试剂混匀。在每个试管中分别加入125 mL 工作试剂，在室温下静置 60 分钟。
4. 显色反应：在每个试管中加入 50 mL 显色剂，混匀并在100°C
加热10分钟。冷却 5-10 分钟后，再在每个试管中加入 100mL DMSO。混匀后以14,000 rpm的速度离心5分钟。取透明平底96孔板，将 250 mL 上清液加到不同孔中。
5. 在549 nm (540-555nm)处读取吸光度。
96孔板荧光法测试步骤
荧光法比比色法敏感十倍。用蒸馏水配备 0, 30, 60 和100 mM 唾液酸标准 。
荧光法和比色法步骤基本相同，但荧光法中，将最终反应的混合物加入黑色平底96孔板。在lex = 555 nm 和 lem = 585 nm处读取荧光强度。
浓度计算
用标准品的吸光度或荧光强度值减去空白值(4号)，对标准品浓度作图并得出斜率。样本的唾液酸浓度计算如下：
R样品和R对照 分别是样品和蒸馏水对照(4号)的吸光度或荧光强度值。n是样品的稀释系数，TSA 测试中 n = 5 ，FSA 测试中 n = 1 。
注: 若计算出样本的唾液酸浓度高于测试范值，需用水稀释样本并重复检测，结果需乘稀释系数(n)。
单位换算： 1000 mM NANA相当于30.9 mg/dL或309 ppm。
实验必需品(未提供)
吸液用仪器，离心管，离心分离机，透明平底96孔板，加热块，黑色96孔板，吸光率阅读器。