葡聚糖凝胶G-100（Bio-sep G-100）产品说明 葡聚糖凝胶是一种具有三维网状结构的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成的，交联度越大，网孔结构就越紧密，吸水后的体积膨胀就越小，能允许进入凝胶内部的分子的分子量也就越小，反之亦然。层析时，大于凝胶孔径的大分子，被阻于凝胶相外，沿着凝胶颗粒之间的间隙走，下移速度最快，故最先洗脱下来，中分子物质部份进入凝胶内部，洗脱速度为其次，而小分子物质因全部进入凝胶，受到阻力最大，故最后被洗脱下来，如此物质得到分离。 1 化学和物理性质 葡聚糖凝胶G-100是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。型号G表明每克于凝胶吸水量的多少，G-100表明每克干凝脱胶吸水10毫升。这表征了凝胶所能膨胀的倍数，亦间接表征了凝胶孔径的大小。 葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。 G-100有不同的粒度。颗粒愈细，分离效果愈好，但粒子太细将影响流速，造成洗脱时间过长，易造成生物制品的变质。 反之，粒子太粗则洗脱过快，峰型不集中，分离效果不佳。超细级的葡聚糖凝胶一般用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。 1.1 化学稳定性 葡聚糖凝胶G-100不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。 1.2 物理稳定性 葡聚糖凝胶G-100并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。 2 产品说明 产品名称 粒径（干） 粒径（湿） 溶胀度 应用 G -100 粗 40-120 103-310 15-20 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定、细胞分离等。 细 20-50 26-103 特制 40-70 70-160 3 使用方法 3.1 乙醇浸泡 在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用去离子水洗去残存的乙醇滤干。 3.2 去离子水浸泡 室温下，在去离子水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀。 3.3 盐酸浸泡 在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性。 3.4 装柱 将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层。 3.5 平衡 上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值） 3.6 上样 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50 cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。 3.7 洗脱方法 可以用去离子水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化。 3.8 在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。