步骤1:目标基因全基因合成

步骤2:目标基因亚克隆到哺乳动物细胞表达载体
步骤1，2详细情况可参考 基因获取及蛋白表达载体设计、构建服务

步骤3:小量转染并通过Western-blot检测表达：
 利用转染试剂将重组质粒转入合适的哺乳动物细胞中。
 从转染后24到72小时，每12小时取样，通过SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白表达情况。
 可提供表达细胞株：293，293T，NIH 3T3，COS-7，CHO。
提供客户：目标蛋白表达结果。
时间：1周
备注：1. 如果转染不成功，则不收取费用。如果没有检测到目标蛋白表达，也要收取部分实验费用。
2. 每次Western-blot检测最多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供。另外由于Western-blot检测结果受很多客观因素影响，因此我们并不能确保检测结果（可能会出现假阳性或是假阴性的结果）。如果结果不正常，我们可以免费重做一次。

步骤4. 目标蛋白表达及纯化：
 培养500ml哺乳动物细胞，然后将重组质粒转染到细胞中，通过瞬时表达产生目标蛋白。
 收集含有目标蛋白的部分（细胞或培养上清）。
 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供客户：纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90以上。


时间：3~4周

步骤5. 目标蛋白的再加工及详细检测
 内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
 通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。
提供客户：加工后的终产品及相关实验和检测报告。

时间：1~2周

步骤6. 筛选稳定高表达细胞株：
 将转染后的哺乳动物细胞团转到96孔细胞培养板内，然后加入含有MTX的培养基。
 当细胞长到大约2/3孔时，取培养上清检测表达。
 挑出高表达的细胞团用于下一轮筛选，并在下一次细胞培养基中提高MTX的浓度。
 重复加压筛选过程，提高细胞株的表达量直到获得合适的稳定表达株。
 通过SDS-PAGE电泳检测每步表达结果。
 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供客户：稳定的高表达细胞株及筛选报告。
时间：6~12周
备注：因为每个重组蛋白的表达量受多种条件影响，我们并不能保证最终稳定株的表达量，但一般比瞬时表达时的表达量要高。

步骤6. 大规模制备
提供客户：合格的目标蛋白及服务报告。
时间：协商 ,