Rosetta 2(DE3)pLysS感受态细胞-克隆与表达-试剂-生物在线
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Rosetta 2(DE3)pLysS感受态细胞

Rosetta 2(DE3)pLysS感受态细胞

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产品名称: Rosetta 2(DE3)pLysS感受态细胞

英文名称: Rosetta 2(DE3)pLysS

产品编号: GST-010A

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产品产地: 长沙

品牌商标: axybio

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使用范围: null

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感受态细胞名称:

 Rosetta 2(DE3)pLySs

菌株类型:

E.coli

货号:

GST-010A

培养基:

LB培养基

生长条件:

37 有氧

基因型:

Rosetta 2(DE3)pLySs感受态细胞菌株基因型

抗性:

氯霉素

质粒转化条件:

42 热激

应用:

蛋白表达

诱导方法:

IPTG

菌株特点:


Rosetta
系列菌株来源于BL21系列宿主菌,该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子,增加了真核细胞的蛋白表达水平。

Rosetta2(DE3)pLySs
来源于Rosetta(DE3),本菌株含有pRARE2质粒,除了能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA六个稀有密码子的tRNA外,还提供了第七个稀有密码子CGGtRNA。同时,pRARE2质粒具有氯霉素抗性。

Rosetta2(DE3)pLySs
载体通过提供稀有密码子,使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌,能够提供更加通用的蛋白质表达,从而提升目的蛋白表达水平。

DE3
是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。

含有pLSs质粒,pLySs质粒能够产生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-pBR322-衍生的质粒互相共存。

 

使用方法:

1)取出感受态细胞,手心融化感受态或者置于冰上5min解冻。

2)然后将连接产物10ul加入感受态中(100ul),轻弹感受态离心管底部,混匀,冰浴30min

342℃水浴热激90S,之后再冰浴5min

4)取出离心管(感受态),吸水纸吸去离心管外壁水分,室温放置10min

5)每管中加900μl LB(SOC)培养基(不含抗生素)37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

6)室温4,500rpm离心5分钟,弃去900μl上清后,用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含抗性的的LB琼脂平板。

7)将平板置于室温直至液体被吸收。

8)倒置平皿,于37℃培养,12~16小时后可出现菌落。