国内库成纤维 ：细工列出各类细胞系，全部由国内正规库（公司来源暂不做讨论范围内）

3T3 swiss

3T3L1

3T6swiss

BALB/C 3T3

CCC-ESF-1

CCC-HPF-1

HFSF

MEF

MRC-5

NBTF

NIH3T3

OP9

PA12

PA317

Pt67

RCBBF

RCFBF

RYTF

UMNSAH/DF1

WI-38

WI38/VA13

φ2

二倍体对完全培养基PH要求严格，大厂家及现配现用是个不错的方法。

密度抑制解决：不要长太满，勤传代，生长天数较长的先摸出适应的培养条件，进口耗材，瓶推荐（皿PH变化快）耗材U型低是这类细胞研究很早推出的，目前类器官应用较多。-种子及前期大量扩增需求。

分化后培养状态探讨，这种状态下的细胞增殖较慢（大多数细胞有成纤维型生长成圆形），结合目前培养耗材更新（耗材底部营养可交换，成层生长可以试下，也是类器官方面耗材主流）理论上可行，国内正规库在维持培养上已经有十几年的经验，细胞一年内维持培养还比较容易实现，也是密度限制一种可行性验证。

20230828:线粒体大小有实验室做过统计及测量数据，能否共享，我们做些建系相关统计，胶质2-4um可进出细胞。正常肝40um，其他组织有老师做长期统计的吗？

用胶原、赖氨酸等处理下板子，增加贴壁能力的目的实验，可参考我司促贴壁试剂，效果更优，最近实验验证是RAW264.7细胞促贴壁验证，增殖过程中细胞形态无变化，也说明促贴壁试剂对细胞无影响。

胰酶消化：我司优化后胰酶优势，不怕消化过，充分利用胰酶化学作用使细胞成单个状态，传代后的细胞，不需细胞膜恢复，直接增殖生长。

3T3一L1传代需小牛血清理由：当细胞从快速分裂到汇合和接触抑制状态时，细胞经历脂肪样转化前脂肪。培养基中的高血清含量可提高脂肪积累[PubMed ID：4426090 ]

Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37C to facilitate dispersal.

Volumes used in this protocol are for 75 cm2 flask; proportionally reduce or increase amount of dissociation medium for culture vessels of other sizes. Corning? T-75 flasks (catalog #430641) are recommended for subculturing this product.--该耗材国内应用较少，前期种子阶段培养推荐康宁-3799-96孔U型低耗材替代。

二甲基亚砜敏感，解冻后应立即去除冷冻保护剂，在9-10毫升完整的完全培养基溶液中进行缓慢离心（125×g，10分钟）

上述要点对后面有类器官，外囊泡，需大量扩增细胞要求的实验需求的用户，需细胞数量与质量提升做好基础培养可深入讨论，讨论前需详细告知试剂耗材及操作步骤，实验目的需求或细胞具体要求。成纤维因子自分泌研究用户可注明，我司目前有些设备资源可共享，运作成本较高，详细可讨论。

20220716进展

成团成片特性细胞大多数上皮（有半悬半贴壁特性，正常组织细胞系都有这类特性，常规手法冻存复苏后活率低，恢复生长时间长）

免疫悬浮类离体后前几代培养，或这类特性细胞系类前期传代培养中。

无血清培养基应用的细胞-工业应用的解决团聚成份已有成熟应用，无血清开发也是用化学成份替代胎牛找到更合适的成份与比例。不含血清培养上清利用替代血清成份已有几个大公司在应用。无血清上清成份分析课题也有不少实验室在延展实验。

我们平时统计相关问题，在团聚与解离细胞培养驯化技术储备应用有些方法，目的是在提高转染效率，冻存复苏提高细胞活率，复苏后救助细胞。精准控制团聚与解离还有待更多实验数据（细胞反向驯化也有些方法储备），在融合细胞过程中，利用团聚与解离特点可试试能否提高融合效率，有这方面有想法的用户，可讨论具体。列出细胞名称，培养特点，问题描述。融合后杂交瘤优化培养基培养方案已有（也适合二倍体类培养基减血清方案）WI-38 MRC5这类可标注。

细工保种备份国产体系推荐

细工开发相关试剂：Optimized Trypsin 维持培养基 增强型贴壁试剂 转染试剂  PBS（临床级别原料）

20230827：长效谷氨酰胺常用DMEM，1640( 欢迎各位海归、工厂评测并备份国产体系，评测中各种问题互相讨论学习（建系类应用配套相关培养基，保种级别，申请试用可来信告知，我们常年保种体系筛出的成熟体系，使用中问题，培养中问题都可讨论），长期评测。类器官，人造肉推荐系列培养体系，推荐理由是省去补加谷氨酰胺，与原代培养特性类似，需胚胎培养基成份加减我司全部现货，来源不同组织培养特点不一，可详细讨论，细工对常见问题统计较多，技术储备足，配套方案，可行方案较多。各类成份尽量使用临床级别，成本较高。稳定性优势很明显，大包装等减少成本预算。

 上述长效DMEM、1640 、 PBS（临床级别原料）一升包装100元，评测方法推荐慢病毒腺病毒上清效价长期评测比较，细工产品有明显优势。可与任意知名品牌做比较。