单克隆简易方法，新手操作一遍过，图片是新手第二次验证图。

细胞系验证按说明就可以，原代耐药株等可讨论痛点，

图二要点说明，两堆细胞，不生长单个的就不建议克隆，那堆生长顺利的，后面会生长顺利

留邮箱及实验室名称，后期稳转株POTOCOL出来，合作原代建系，

痛点讨论：离体处理、培养体系，稳转株药加量筛选稳转株、冻存复苏要点及各实验室验证陆续会有反馈数据。

离体活性更高可行方案：难消化下来大部分问题是活性这部影响的

20240630-种子库精筛，粗筛

工业相关案例参考-噬斑等实验参考
MDCK反向驯化（贴壁太牢，胰酶消化过程中对细胞损伤并不适合反向驯化）更新补充
经消化统计与进展公布讨论，
单细胞、肝原代、类器官、巨噬原代、系：传代后一代难消化（离体处理步骤，离体活性）系常见消化不下来，文献习惯，结合自己常年储备统计，给出两点参考。
难消化建议办法：培养皿传代前加层血清，加一层天然物胶质稠度隔离，会好很多。深入研究的用户可共享培养基稠度讨论（无血清开发，天然产物与成分限定研发）
常见巨噬很多老师用细胞挂，因我们后面有长期培养基建系目的，超量培养，维持培养，细胞产物生产需更高质量细胞提高产物产量，挂后细胞损伤大（近年有高浓度胰酶消化后吹打损伤细胞文献，这里步阐述）有相关开发产品厂家，我们都可讨论与共享技术部分与共同验证（肝，胰岛胰腺已开始合作实验室建系共同验证）
需细胞活性更高，建系目的，类器官（先建系，在规模培养，先二维，在三维成球）同道中人，共享提高组织到细胞，无外力（化学、机械）影响合作实验验证，也可通过类似问题，验证细工方案可行性，统计理念重要。

提升种子库质量简易方法，单克隆，慢培养（精筛，促筛）都是简单可行方案，珍贵株推荐细工冻存复苏，优化胰酶等试剂与方法，各类难点痛点都可预实验验证。

培养方案：含血清可行性，可同时无血清同步

稳转株：超量加药筛选，

冻存复苏：基于DMSO方案，对冻存挑剔细胞系，原代高活率方案，无血清方案新型冻存液方案对比及问题统计

上述包括内容较多，这里不展开。十年细胞培养问题统计后，呈上

20240622

单克隆准株筛选，相关评项想推荐（给保种试剂耗材更多优略理由）
简单易上手步骤推广目的是给单克隆提供一套可行，易行方法，用过我们potocol,建议文献标注下我公司名称，另单克隆过程中，如能保存并发给我们细胞全盘（或者较大面积清晰图片，我们给出同级别试剂耗材克隆图片参考）
该目的是给出不同级别试剂耗材长期培养后对细胞是否有质量影响统计参考依据。例如生长慢，成瘤不稳定，后续实验结果不理想，从细胞质量上多一项评价。

文章标注，
BeiJing XiGong biological technology co., LTD
Simple monoclonal(SM-1)

思考：国外建系都差不多两天能穿代，可从最近几年原代相关统计看，离体后细胞增殖都要4-7天，建系后应该会更慢些，ATCC看过不少细胞系介绍，都说是慢慢优化，这个问题困扰了很长时间，每天工作就是问题细胞统计，难养系统计的比较多，方法也看了不少，可慢慢优化步骤还是套不进去（国内了解几个建系老师培养的都不是很顺利），能提升系的增殖时间，这个单克隆开了窍，优化准株单克隆筛选，挑出更强壮细胞，大大提升细胞质量，结合以前资料，成瘤不稳定组单克隆后，大大提升细胞质量，不成瘤组小心德是，开始提出解决思路是，慢操作（慢二氧化碳，慢生长，慢传代）其实也是一种另外形式筛选单克隆（成干，甲基纤维素)也都是生长及较慢共同特性，不含血清也有一定生长影响，细胞要要适应一段时间，那些状态太差的，在生长过程中也被淘汰。慢操灵感作来自协和库老师指导培养悬浮免疫细胞救助。
单克隆历史有了解熟悉的老师路过，给些参考资料，我查下单克隆后细胞株建系情况，这部分资料还没深入学习，暂时判断，发明单克隆这个老师应该建了不少细胞系，或者优化了不少株，北京老师要有这方面资料，我可上门拜访并学习。讨论下国内建系相关（有些注意事项这里不一一阐述了）

20240624

工业案例应用一：禽类共生病毒的分离应用：腺，豆、圆环的单种纯化分离，理论方法，预实验都比较理想，更多案例应用还在技术储备中，与各位老师合作讨论难点痛点，北京实验室可参与课题讨论，就难点痛点问题，我们做些统计先，

国内建系实验室，生长时间过长的，也可考虑单克隆或慢培养两种技术方案，难消化细胞建议从源头考虑重新构建，难点都可通过类似问题细工简单解决方案验证，例如：难消化，细工方案通过提高组织活性，可行性高，操作简单，后面单克隆，稳转株，冻存复苏等，都是基于可行性后，把间隙难点痛点先行验证可行方案，在运用在建系上。

蛋白互作用对细胞维持培养要求高用户，可把问题先讨论后，细工给些参考建议。

国内血清生产厂家，能固定原料，成本较高的厂商，工业应用我们可参与筛出工业用细胞株，建系等合作，

20240628

成瘤前细胞优化参考

成瘤前精筛选与粗筛选
这两种方法都很简单
精筛选：单克隆筛选，细工potocol方法简单，我这个案例新手一遍就过，用户给张单克隆图，我们也行参与分析。（列出试剂耗材，操作概述，生长情况）我们给些建议，要能给出厂家货号，我们给出备份厂家及货号
粗筛选：成瘤不稳定组参考，让假株经长时间培养后死掉，不用管它，通过长时间慢长起来的，都是克隆小岛汇合细胞，前几代慢培养可能慢，慢慢长起来后，就会顺利生长。这个注意事项是慢长后容易成片，这是胰酶对细胞伤害很重要，我那个胰酶是重点解决问题配套试剂（胰酶敏感细胞筛选统计应用过：难养系，如上皮、肝类、胰岛胰腺类、巨噬类、腺类、胶质类、免疫悬浮、乳腺上皮类、SV40,hTERT、原代类。胰酶敏感细胞生长特性：成团成片，堆叠式生长，锚着不牢，锚着太牢消化太久的，如何避免胰酶损伤，不能重做的可培养板加层血清解决，原代建系要考虑长久实验需求的，我们可讨论提高组织-细胞挺高活性，无外力（化学，机械）力可行性，原代建系我们重点室，药厂多家实验室共同验证方案更可行，肝，胰岛胰腺已开始筹备杭州，上海，广州，北京开始统计合作实验室，先行通点统计沟通可行方案，理论上全过并相关预实验验证顺利后，一起完成建系实验，药厂拿走细胞可行方案，科研拿走文章，细工完成实施，
粗筛选简述
瓶，慢养慢传代慢生长，无损胰酶，少二氧化碳，减缓生长，减缓分化，理由：来自成干成球培养，难养细胞株痛点统计规律相似特点。分出一批评测，操作更简单，给成瘤不稳定组，提供一组备份条件，从成干特点上看（缺氧培养减缓细胞分化-这个特点又能起到明显作用后，我们可能考虑离体后巨噬培养看看能否控制细胞分化，后面给生产型用户做些技术储备），优势挺大的，也给出一套备份技术储备。
备注：如您对干细胞培养相关了解，相关参考也可发我下，我们一起验证优略。该思路来源类器官统计可行性及目前试剂耗材国产普及，我们目的是国产试剂耗材原代建系。冻存复苏优化应该也是原代建系中重点，相关问题心得都可讨论。

更多统计内容：培养箱技术检测（老培养箱二氧化碳给量过大普遍存在），二氧化碳厂家纯度，遇到过低级别二氧化碳，问题找了两年，试剂四处评测，最后是二氧化碳问题，建系是严谨活，每个细节到位，有必要国内四个正规库我们都能请来技术支持，包括细分领域大牛实验室合作，学习请教问题十多年了，每每都能如愿。
例如：国产试剂耗材以前很少统计，现在有些高质量的也可完成相关统计。

试剂耗材我们分种子库级别，和普通级别，后面问题沟通请先说明试剂级别，两种我们后续都有统计，例如单克隆图，准株，假株比例多少，就能判断整体细胞水平，结合耗材手法判断，即便使用种子库级别试剂耗材，细胞处理过要求快，细胞也会假株数量增多，为更优结果，啰嗦这莫多，为建系做好充足准备，各位技术多多支持，没必要藏着哈，特斯拉要不公布专利，自己打败油车，得五百年（刚学完清华总裁班）。现在每年毕业生这莫多，没点震撼突破，不行的。

基质胶国内生产合作
目前已有细胞工厂生产公司，能否加条合作生产线，维持培养上清项目合作，没能力建自己的工厂，可项目不错，超长时间维持培养后，上清开发配套因子、外泌体、基质胶、ADC等科研得一些产品，我们自己业务就是各种细胞培养问题统计与配套产品开发，我们增强贴壁试剂配套细胞工厂生产优势很大，工业应用也有不少，也可接些发酵罐生产转成细胞工厂应用含血清上游开发，这个优势是细胞缓冲能力强，生长完全控制（长、停、维持）这类到终末收前可换成无血清，维持培养比无血清时间会长很多。