一、番红固绿详情介绍： 1.植物番红固绿染色：植物染色有多种染色方式，其操作流程和动物染色类似。番红O-固绿染色多用于软骨的染色，有时也可用于植物染色，木化、栓化和角质的细胞被番红染成鲜红色，纤维素的细胞壁被固绿染成绿色。固绿是一种酸性染料，可将纤维素的细胞壁和细胞质染成蓝绿色，该染液染色速度快，通常10-30s即可，不易褪色。 2.骨番红固绿染色：番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合，嗜碱性的软骨与碱性的染料番红结合呈红色。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O 淡染或不着色。嗜酸性染料的固绿与软骨下骨胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 二、实验流程： 植物番红固绿实验步骤： 1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗； 2.蒸馏水水洗2次，5min/次； 3.滴加番红染液染色45min左右，室温； 4.自来水水洗，洗去多余染料； 5.入90%酒精分化至组织附着的染料退去； 6.滴加固绿染液染色10-30s； 7.无水乙醇洗去多余染料，镜下观察番红与固绿着色情况； 8.入1:1二甲苯无水乙醇混合溶液2min，至载玻片透明； 9.入二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，二甲苯Ⅲ5min； 10.中性树胶封片。 骨组织番红固绿实验步骤： 1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗； 2.固绿染色3-5min，水洗去多余染液，至软骨呈无色； 3.番红染色1-2min，水洗去多余染液； 4.1% 醋酸分化，水洗； 5.95%酒精、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。 四、结果判读：(1)植物番红固绿结果判读：木质化的细胞壁及核呈红色，薄壁细胞、细胞质呈绿色。 （2）骨组织番红固绿结果判读：软骨基质深红色，细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色。